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體外受精(In Vitro Fertilization)是指哺乳動(dòng)物的精子和卵子在體外人工控制的環(huán)境中完成受精過(guò)程的技術(shù)，英文簡(jiǎn)稱為IVF。由于它與胚胎移植技術(shù)(ET)密不可分，又簡(jiǎn)稱為IVF-ET。在生物學(xué)中，把體外受精胚胎移植到母體后獲得的動(dòng)物稱試管動(dòng)物(test-tube animal)。這項(xiàng)技術(shù)成功于20世紀(jì)50年代，在最近20年發(fā)展迅速，現(xiàn)已日趨成熟而成為一項(xiàng)重要而常規(guī)的動(dòng)物繁殖生物技術(shù)。
體外受精技術(shù)對(duì)動(dòng)物生殖機(jī)理研究、畜牧生產(chǎn)、醫(yī)學(xué)和瀕危動(dòng)物保護(hù)等具有重要意義。如用小鼠、大鼠或家兔等作實(shí)驗(yàn)材料，體外受精技術(shù)可用于研究哺乳動(dòng)物配子發(fā)生、受精和胚胎早期發(fā)育機(jī)理。在家畜品種改良中，體外受精技術(shù)為胚胎生產(chǎn)提供了廉價(jià)而高效的手段，對(duì)充分利用優(yōu)良品種資源，縮短家畜繁殖周期，加快品種改良速度等有重要價(jià)值。在人類，IVF-ET技術(shù)是治療某些不孕癥和克服性連鎖病的重要措施之一。體外受精技術(shù)還是哺乳動(dòng)物胚胎移植、克隆、轉(zhuǎn)基因和性別控制等現(xiàn)代生物技術(shù)不可缺少的組成部分。
體外受精過(guò)程需要從體內(nèi)取出成熟的卵母細(xì)胞和精子，在離體條件下培養(yǎng)一段時(shí)間，然后進(jìn)行人工授精，受精卵需要在體外培養(yǎng)發(fā)育成胚胎才能進(jìn)行后續(xù)的應(yīng)用（例如胚胎移植等），這些過(guò)程中由于脫離了母體的條件，需要用到各類的培養(yǎng)液模擬體內(nèi)的生理環(huán)境，今天就來(lái)給大家介紹一下體外受精過(guò)程中常用的一些培養(yǎng)基：
卵母細(xì)胞的培養(yǎng)：
卵母細(xì)胞體外成熟是一個(gè)復(fù)雜的過(guò)程，細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核需要發(fā)生一系列聯(lián)系性的結(jié)構(gòu)和分子方面的變化，才能完成胞核和胞質(zhì)的成熟。大量研究證明哺乳動(dòng)物卵母細(xì)胞體外成熟所采用的培養(yǎng)液不僅對(duì)卵母細(xì)胞的成熟，而且對(duì)受精和隨后的胚胎發(fā)育均有著顯著的影響。目前對(duì)牛卵母細(xì)胞體外成熟的研究主要集中在以TCM199為基礎(chǔ)培養(yǎng)液，再添加激素，血清，卵泡液， 生長(zhǎng)因子及顆粒細(xì)胞等成分來(lái)模擬卵母細(xì)胞體內(nèi)成熟的環(huán)境以及各種成分間的相互作用以期達(dá)到與體內(nèi)相當(dāng)?shù)某墒煨Ч?/span>
常用的卵母細(xì)胞成熟培養(yǎng)液配方：
基礎(chǔ)培養(yǎng)液為TCM-199，添加10%FCS，25mM Hepes、0.55mg/ml丙酮酸鈉及100IU青、鏈霉素；
精子的獲能及卵子受精：
精子獲能：哺乳動(dòng)物精子的獲能方法有培養(yǎng)和化學(xué)誘導(dǎo)兩種方法。牛、羊的精子常用化學(xué)藥物誘導(dǎo)獲能，誘導(dǎo)獲能的藥物常用肝素和鈣離子載體。受精：即獲能精子與成熟卵子的共培養(yǎng)，除鈣離子載體誘導(dǎo)獲能外，精子和卵子一般在獲能液中完成受精過(guò)程。受精培養(yǎng)時(shí)間與獲能方法有關(guān)。在B2液中一般為6-8小時(shí)而用TALP液作受精液時(shí)可培養(yǎng)18~24h。精子和卵子常在小滴中共培養(yǎng)，受精時(shí)精子密度為1~9×106/ml，每10微升精液中放人1~2枚卵子，小滴體積一般為50~200微升。
精子細(xì)胞培養(yǎng)液配方推薦：
精子洗滌液：BO/TALP基礎(chǔ)液+6mg/ml BSA(FractⅤ)+5mM咖啡因
精子獲能液：BO/TALP基礎(chǔ)液+6mg/ml BSA(FractⅤ)+5mM咖啡因+60ug/ml肝素
胚胎體外培養(yǎng)：
胚胎培養(yǎng)液分為復(fù)雜的和化學(xué)成分明確的培養(yǎng)液兩大類。復(fù)雜培養(yǎng)液中的成分很多，除無(wú)機(jī)和有機(jī)鹽外，還添加維生素、氨基酸、核苷酸和嘌呤等營(yíng)養(yǎng)成分和血清。常用的胚胎培養(yǎng)基有M199、KSOM和F10，用它們培養(yǎng)胚胎時(shí)，可以采用體細(xì)胞共培養(yǎng)體系，即體細(xì)胞與胚胎在微滴中共同培養(yǎng)，利用體細(xì)胞生長(zhǎng)過(guò)程中分泌的有益因子，促進(jìn)胚胎發(fā)育，克服發(fā)育阻斷。
常見胚胎體外培養(yǎng)液配方推薦：
M199+10%FCS+2.2mg/100ml丙酮酸鈉+100IU/ml雙抗
mSOF+10%FCS+2.2mg/100ml丙酮酸鈉+100IU/ml雙抗
產(chǎn)品推薦：
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產(chǎn)品名稱 |
貨號(hào) |
規(guī)格 |
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HEPES-TALP培養(yǎng)液 |
500ml、6*500ml |
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IVF-TALP培養(yǎng)液（TALP基礎(chǔ)培養(yǎng)液） |
100ml、6*100ml |
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sperm-TALP培養(yǎng)液 |
IVL03 |
100ml、6*100ml |
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KSOM+AA培養(yǎng)基 |
100ml、6*100ml |
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SOF（合成輸卵管液）培養(yǎng)基 |
IVL05 |
100ml、6*100ml |
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KSOM+AA（無(wú)蛋氨酸） |
IVL08 |
100ml、6*100ml |
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M199 |
MDP02、MDP04 |
10LT，50LT，10*1LT |
上述培養(yǎng)基成分表：
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組分 |
IVL01 |
IVL02 |
IVL03 |
IVL04 |
IVL05 |
IVL08 |
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Glycine（甘氨酸） |
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3.75 |
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3.75 |
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L-Alanine（丙氨酸） |
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4.45 |
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4.45 |
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L-Arginine,Hydrochloride |
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63.20 |
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63.20 |
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L-Asparagine,Monohydrate |
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7.50 |
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7.50 |
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L-AsparticAcid（天冬氨酸） |
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6.66 |
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6.66 |
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L-Cystine（胱氨酸） |
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12.02 |
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12.02 |
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L-Glutamine（谷氨酰胺） |
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146.15 |
29.23 |
146.15 |
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L-Histidine,Anhydrous（組氨酸） |
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20.96 |
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20.96 |
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L-Isoleucine（異亮氨酸） |
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26.23 |
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26.23 |
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L-Leucine（亮氨酸） |
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26.24 |
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26.24 |
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L-Lysine,Hydrochloride（賴氨酸） |
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36.52 |
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36.52 |
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L-Methionine（甲硫氨酸） |
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7.46 |
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L-Phenylalanine（苯丙氨酸） |
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16.52 |
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16.52 |
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L-Proline（脯氨酸） |
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5.76 |
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5.76 |
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L-Serine（絲氨酸） |
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5.26 |
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5.26 |
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L-Tryptophan（色氨酸） |
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5.11 |
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5.11 |
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L-Tyrosine（酪氨酸） |
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18.12 |
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18.12 |
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L-Valine（纈氨酸） |
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23.42 |
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23.42 |
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CalciumChloride,Anhydrous |
220.2 |
222.2 |
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CalciumChloride,Dihydrate |
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310 |
250.0 |
261.68 |
250 |
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EDTA,DisodiumSalt,Dihydrate |
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3.72 |
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3.72 |
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MagnesiumChloride,Hexahydrate |
83.9 |
101.65 |
81.32 |
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MagnesiumSulfate,Heptahydrate |
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49.3 |
372.18 |
49.3 |
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PotassiumChloride |
238.72 |
238.4 |
230.95 |
186.38 |
533.78 |
186.38 |
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PotassiumPhosphate, |
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47.99 |
161.95 |
47.99 |
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SodiumBicarbonate（碳酸氫鈉） |
168 |
2100 |
2100 |
2100.25 |
2100.25 |
2100.25 |
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SodiumChloride（氯化鈉） |
6669 |
6669 |
5850 |
5551.79 |
6293.99 |
5551.8 |
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SodiumPhosphate,Monobasic, |
48 |
55.2 |
40.02 |
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BovineSerumAlbumin,FractionV |
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1000 |
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1000 |
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CitricAcid,Trisodium |
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99.99 |
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D-Glucose,Anhydrous |
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36.03 |
|
36.03 |
|
HEPES |
2384 |
|
2383 |
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PhenolRed,SodiumSalt |
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10.0 |
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PyruvicAcid,SodiumSalt |
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22 |
44.02 |
22.0 |
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SodiumL-Lactatesolution(60%) |
1.416 |
1.416 |
3.6800 |
1.416 |
0.757 |
1.416 |
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Myo-Inositol（肌醇） |
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499.04 |
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