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標(biāo)準(zhǔn)型金牌基質(zhì)膠
| 貨號(hào) | 082704 | 售價(jià)（元） | 3281 |
| 規(guī)格 | 10ml | CAS號(hào) |
- 產(chǎn)品簡介
- 相關(guān)產(chǎn)品
產(chǎn)品信息
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貨號(hào) |
產(chǎn)品名稱 |
規(guī)格 |
儲(chǔ)存/運(yùn)輸條件 |
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082704 |
標(biāo)準(zhǔn)型金牌基質(zhì)膠 |
10mL |
≤-20°C |
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0827045 |
標(biāo)準(zhǔn)型金牌基質(zhì)膠 |
5mL |
≤-20°C |
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082704 T |
標(biāo)準(zhǔn)型金牌基質(zhì)膠 |
1mL |
≤-20°C |
產(chǎn)品簡介
?；飿?biāo)準(zhǔn)型金牌基質(zhì)膠是一種可溶性的基底膜基質(zhì)膠，這種基質(zhì)是通過基因編輯技術(shù)將多種表達(dá)膠原蛋白的基因序列插入到經(jīng)永生化處理的小鼠細(xì)胞體系中，并在實(shí)體中抽提出來的。它的主要成分是層粘連蛋白，接著是膠原蛋白IV、硫酸乙酰肝素蛋白多糖和巢蛋白?；啄せ|(zhì)也含有轉(zhuǎn)化生長因子β、表皮生長因子、類胰島素生長因子、成纖維細(xì)胞生長因子和在中自然出現(xiàn)的其他生長因子。
推薦應(yīng)用
細(xì)胞增殖或分化相關(guān)的二維或三維培養(yǎng)，以及細(xì)胞形態(tài)的研究。常用的實(shí)驗(yàn)有細(xì)胞侵襲、血管生成和類器官培養(yǎng)等。
產(chǎn)品參數(shù)
來源：小鼠
外觀：①顏色：含酚紅基質(zhì)膠表現(xiàn)為黃色-粉紅色，無酚紅基質(zhì)膠表現(xiàn)為半透明淡黃色； ②形態(tài)：標(biāo)準(zhǔn)型基質(zhì)膠4℃溶解后，呈透明流動(dòng)液態(tài)狀態(tài)；高濃度基質(zhì)膠0℃溶解后，呈透明流動(dòng)液態(tài)狀態(tài)，4℃久置呈半凝膠狀。
濃度多樣性： 蛋白濃度范圍在8~26mg/mL之間
內(nèi)毒素： ≤ 4.5EU/ mL
凝膠時(shí)間：室溫條件下5-30min凝膠，溫度22°C至37°C時(shí)成膠速度加快
2D/3D應(yīng)用非常廣泛：干細(xì)胞研究(分化、維持）、研究（侵襲）、 3D細(xì)胞培養(yǎng)（類器官、3D細(xì)胞球）、體內(nèi)植入（皮下成瘤、血管生成、栓塞）
產(chǎn)品質(zhì)量控制規(guī)范
• 通過小鼠抗體產(chǎn)物（MAP）檢測進(jìn)行常規(guī)小鼠菌落病原體篩選
• 提取自不含LDEV的小鼠細(xì)胞
• 對(duì)包括LDEV在內(nèi)的多種病原體進(jìn)行廣泛的PCR檢測， 確保對(duì)生產(chǎn)過程中使用的原材料進(jìn)行嚴(yán)格控制
• 對(duì)細(xì)菌、真菌和支原體進(jìn)行檢測，確保陰性
• 使用BCA方法測定蛋白濃度
• 使用血清學(xué)方法檢測內(nèi)毒素水平
• 在37℃下進(jìn)行14天的凝膠穩(wěn)定性測試
• 每批次產(chǎn)品進(jìn)行生物學(xué)功能驗(yàn)證（類器官培養(yǎng)與分化實(shí)驗(yàn)；皮下成瘤實(shí)驗(yàn)；干細(xì)胞培養(yǎng)；血管生成實(shí)驗(yàn)等）
• 對(duì)包括LDEV在內(nèi)的多種病原體進(jìn)行廣泛的PCR檢測， 確保對(duì)生產(chǎn)過程中使用的原材料進(jìn)行嚴(yán)格控制
使用注意事項(xiàng)
實(shí)驗(yàn)環(huán)境
• 環(huán)境溫度：20–25℃ ；環(huán)境濕度：40–60%。
• 請(qǐng)穿戴個(gè)人防護(hù)裝置，注意實(shí)驗(yàn)室安全。
溫度控制
• 基質(zhì)膠產(chǎn)品儲(chǔ)存在-20℃時(shí)是穩(wěn)定的。通過分裝并一次性使用分裝物來盡可能減少產(chǎn)品的凍融次數(shù)。在-20℃冰箱中儲(chǔ)存分裝物直到準(zhǔn)備使用。請(qǐng)不要儲(chǔ)存在無霜冰箱中。請(qǐng)務(wù)必保持產(chǎn)品的凍存狀態(tài)。
• 因?yàn)槟；飿?biāo)準(zhǔn)型金牌基質(zhì)膠在10℃以上會(huì)開始凝膠化。所以需謹(jǐn)記：?；飿?biāo)準(zhǔn)型金牌基質(zhì)膠和所有與模基生物標(biāo)準(zhǔn)型金牌基質(zhì)膠接觸的培養(yǎng)皿或培養(yǎng)基都應(yīng)該預(yù)冷。在實(shí)驗(yàn)的全部過程中請(qǐng)務(wù)必保持?；飿?biāo)準(zhǔn)型金牌基質(zhì)膠處于冰上。
避免污染
• 實(shí)驗(yàn)操作人員需嚴(yán)格區(qū)分實(shí)驗(yàn)操作臺(tái)、清潔區(qū)和污染區(qū)，確保插取吸頭、加樣、丟棄吸頭的動(dòng)作呈單向流動(dòng)。
• 實(shí)驗(yàn)后使用含 0.5% 次氯酸的消毒液對(duì)實(shí)驗(yàn)操作區(qū)消毒。
其他
• 請(qǐng)將基質(zhì)膠產(chǎn)品小瓶淹沒在碎冰中，并放置在4℃冰箱里過夜解凍?；锘|(zhì)膠，蛋白濃度高時(shí)可能需要更多時(shí)間。請(qǐng)將模基生物標(biāo)準(zhǔn)型金牌基質(zhì)膠全程保持在冰上。無論是開蓋取用產(chǎn)品或者對(duì)產(chǎn)品進(jìn)行分裝，請(qǐng)保持無菌操作。
• 操作過程中，需使用預(yù)冷的移液管輕柔地吹打混勻?；飿?biāo)準(zhǔn)型金牌基質(zhì)膠以確保其均勻性。將?；飿?biāo)準(zhǔn)型金牌基質(zhì)膠分裝到離心管中，每當(dāng)?；飿?biāo)準(zhǔn)型金牌基質(zhì)膠堵塞吸頭和/或移液管測量不精確時(shí)請(qǐng)更換吸頭。如果將產(chǎn)品放置在4℃的冰上 24-48個(gè)小時(shí)，凝膠化的?；飿?biāo)準(zhǔn)型金牌基質(zhì)膠可能會(huì)被重新水化。
操作說明
分裝操作說明
基質(zhì)膠產(chǎn)品儲(chǔ)存在-20℃時(shí)是穩(wěn)定的。通過分裝并一次性使用分裝物來盡可能減少產(chǎn)品的凍融次數(shù)。以下為實(shí)驗(yàn)操作者進(jìn)行分裝操作說明。
1.將基質(zhì)膠置于預(yù)冷盒或碎冰中，放入 4℃冰箱，過夜解凍。
2.將無菌離心管、無菌槍頭等接觸基質(zhì)膠的耗材放預(yù)冷盒中或冰箱中預(yù)冷，分裝前將融化好的基質(zhì)膠表面清潔后放入預(yù)冷盒或碎冰上。
3.在潔凈工作臺(tái)中，用1mL移液槍吸取250µL基質(zhì)膠到離心管里(或根據(jù)每次用量多少進(jìn)行分裝)，標(biāo)注好信息，操作過程中盡量保持低溫，縮短操作時(shí)間。
4.分裝完成后放冰盒中，防止傾倒，并于冰箱保存。分裝后放置于-20℃冰箱中儲(chǔ)存?zhèn)溆谩Ｕ?qǐng)不要儲(chǔ)存在自動(dòng)除霜的冰箱中儲(chǔ)存。使用前將基質(zhì)膠插入預(yù)冷盒或碎冰中，并放置于4°C冰箱中，在冰上過夜解凍，使基底膜基質(zhì)膠在穩(wěn)定的低溫環(huán)境中緩慢充分融化。
使用方法說明
包被涂層方法
?；飿?biāo)準(zhǔn)型金牌基質(zhì)膠可以以幾種方式使用。薄層凝膠法適用于在凝膠頂部接種細(xì)胞，厚層凝膠法允許您在三維基質(zhì)內(nèi)培養(yǎng)細(xì)胞，薄層包被法(不凝膠化)給您提供了復(fù)雜的蛋白質(zhì)層，您可以在其上培養(yǎng)細(xì)胞。您的選擇基于您想要實(shí)現(xiàn)的最終結(jié)果，無論是細(xì)胞生長、附著還是分化。
一、薄層凝膠法
1.依照推薦的方法解凍?；锘啄せ|(zhì)。使用預(yù)冷的移液管，將?；?基底膜基質(zhì)混合至均勻。
2.將培養(yǎng)板放置在冰上，以 50 µl/cm2 向生長表面加入模基生物 基底膜基質(zhì)。
3.將培養(yǎng)板放置在 37 ℃，30 分鐘。
4.如果有必要的話，請(qǐng)?jiān)谑褂脽o血清培養(yǎng)基輕柔漂洗前吸出未結(jié)合的材料。請(qǐng)確保移液器的吸頭不要刮擦包被的表面。培養(yǎng)板現(xiàn)在可以使用了。
二、薄層包被法
1.依照推薦的方法解凍模基生物基底膜基質(zhì)。使用預(yù)冷的移液管，將?；?基底膜基質(zhì)混合至均勻。
2.使用無血清培養(yǎng)基將?；锘啄せ|(zhì)稀釋到需要的濃度。對(duì)于您的實(shí)驗(yàn)應(yīng)用，您應(yīng)該完成以經(jīng)驗(yàn)為主的研究來確定您的最適包被濃度。
3.向被包被的容器中加入稀釋的?；?基底膜基質(zhì)。加入的量應(yīng)該足以容易地覆蓋整個(gè)生長表面。在室溫下培養(yǎng) 1 個(gè)小時(shí)。
4.吸出未結(jié)合的材料并使用無血清培養(yǎng)基輕柔地漂洗。培養(yǎng)板現(xiàn)在可以使用了。
三、厚層凝膠法
1.依照推薦的方法解凍模基生物基底膜基質(zhì)。使用預(yù)冷的移液管，將?；?基底膜基質(zhì)混合至均勻。
2.將培養(yǎng)板放置在冰上。向模基生物基底膜基質(zhì)中加入細(xì)胞并使用預(yù)冷的移液管懸浮。以150-200µl/cm2 向生長表面加入模基生物 基底膜基質(zhì)。
3.將培養(yǎng)板放置在37℃，30分鐘。現(xiàn)在可以添加培養(yǎng)基了。細(xì)胞也可以培養(yǎng)在這一凝膠的頂部。
細(xì)胞復(fù)蘇：
使用細(xì)胞復(fù)蘇溶液在冰上 7 小時(shí)內(nèi)解聚?；锘啄せ|(zhì)能夠?qū)崿F(xiàn)將生長在模基生物基底膜基質(zhì)上的細(xì)胞最有效地復(fù)蘇，或者使用中性蛋白酶，考慮到連續(xù)培養(yǎng)，中性蛋白酶作為一種金屬酶可以分散細(xì)胞。
應(yīng)用操作說明
以下以血管形成實(shí)驗(yàn)為例來進(jìn)行模基生物標(biāo)準(zhǔn)型金牌基質(zhì)膠的應(yīng)用實(shí)驗(yàn)操作說明。
1、設(shè)備、試劑及耗材
1.1設(shè)備：潔凈工作臺(tái)、移液器、二氧化碳培養(yǎng)箱、倒置顯微鏡
1.2試劑：DMEM基礎(chǔ)培養(yǎng)基；ECM 完全培養(yǎng)基；胰酶細(xì)胞消化液、1×PBS溶液
1.3耗材：無菌槍頭；96孔細(xì)胞培養(yǎng)板；無菌EP管等耗材，可根據(jù)實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)自行調(diào)整。
2、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容與方法
2.1實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備：
2.1.1將基質(zhì)膠置于冰盒中，放入 4℃冰箱，使膠能過夜緩慢融化；
2.1.2 4℃預(yù)冷無菌離心管、無菌槍頭、DMEM 基礎(chǔ)培養(yǎng)基等接觸基質(zhì)膠的耗材或試劑；
2.2鋪基質(zhì)膠
2.2.1準(zhǔn)備EP管置冰上，按照下表加入各組分。
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樣品稀釋比例（基質(zhì)膠：培養(yǎng)基） |
原液 |
2:1 |
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DMEM基礎(chǔ)培養(yǎng)基(µL) |
0 |
40 |
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基質(zhì)膠(µL) |
100 |
80 |
注：大多數(shù)情況下，基質(zhì)膠：培養(yǎng)基（2:1）是適用的。
2.2.2 將上述組分按照順序混勻后，以50µL/孔加到96孔板中，重復(fù)兩孔，標(biāo)記好基質(zhì)膠信息及實(shí)驗(yàn)日期，在37℃培養(yǎng)箱中，凝固至少1小時(shí)。
2.3鋪細(xì)胞
2.3.1 取出HUVEC細(xì)胞，胰酶消化。用ECM培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，計(jì)數(shù)，調(diào)整細(xì)胞密度為每孔2×104個(gè)。
2.3.2取上述96孔板以每孔50µL加入細(xì)胞懸液。置37℃二氧化碳培養(yǎng)箱中培養(yǎng)4小時(shí)、24小時(shí)后觀察結(jié)果。