當(dāng)前位置： 首頁(yè) - 產(chǎn)品專(zhuān)區(qū) - 熱銷(xiāo)產(chǎn)品
類(lèi)器官金牌基質(zhì)膠
| 貨號(hào) | 082755 | 售價(jià)（元） | 4792 |
| 規(guī)格 | 10ml | CAS號(hào) |
- 產(chǎn)品簡(jiǎn)介
- 相關(guān)產(chǎn)品
產(chǎn)品信息
|
貨號(hào) |
產(chǎn)品名稱(chēng) |
規(guī)格 |
儲(chǔ)存/運(yùn)輸條件 |
|
082755 |
類(lèi)器官金牌基質(zhì)膠 |
10mL |
≤-20°C |
|
0827555 |
類(lèi)器官金牌基質(zhì)膠 |
5mL |
≤-20°C |
|
082755T |
類(lèi)器官金牌基質(zhì)膠 |
1mL |
≤-20°C |
產(chǎn)品簡(jiǎn)介
?；镱?lèi)器官金牌基質(zhì)膠是一種可溶性的基底膜基質(zhì)膠，這種基質(zhì)是通過(guò)基因編輯技術(shù)將多種表達(dá)膠原蛋白的基因序列插入到經(jīng)永生化處理的小鼠細(xì)胞體系中，并在實(shí)體中抽提出來(lái)的。它的主要成分是層粘連蛋白，接著是膠原蛋白IV、硫酸乙酰肝素蛋白多糖和巢蛋白?；啄せ|(zhì)也含有轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β、表皮生長(zhǎng)因子、類(lèi)胰島素生長(zhǎng)因子、成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子和在中自然出現(xiàn)的其他生長(zhǎng)因子。
推薦應(yīng)用
此款基質(zhì)膠是篩選出的確保能進(jìn)行類(lèi)器官培養(yǎng)的基質(zhì)膠。如果遇到不能用其他類(lèi)型的基質(zhì)膠培養(yǎng)的類(lèi)器官，使用該系列基質(zhì)膠可以保證實(shí)驗(yàn)的有效性和重現(xiàn)性。例如，小鼠腸道類(lèi)器官、肺類(lèi)器官、類(lèi)器官等。
產(chǎn)品參數(shù)
來(lái)源：小鼠
外觀(guān)：①顏色：含酚紅基質(zhì)膠表現(xiàn)為黃色-粉紅色，無(wú)酚紅基質(zhì)膠表現(xiàn)為半透明淡黃色； ②形態(tài)：標(biāo)準(zhǔn)型基質(zhì)膠4℃溶解后，呈透明流動(dòng)液態(tài)狀態(tài)；高濃度基質(zhì)膠0℃溶解后，呈透明流動(dòng)液態(tài)狀態(tài)，4℃久置呈半凝膠狀。
濃度多樣性： 蛋白濃度范圍在8~26mg/mL之間
內(nèi)毒素： ≤ 4.5EU/ mL
凝膠時(shí)間：室溫條件下5-30min凝膠，溫度22°C至37°C時(shí)成膠速度加快
2D/3D應(yīng)用非常廣泛：干細(xì)胞研究(分化、維持）、研究（侵襲）、 3D細(xì)胞培養(yǎng)（類(lèi)器官、3D細(xì)胞球）、體內(nèi)植入（皮下、血管生成、栓塞）
產(chǎn)品質(zhì)量控制規(guī)范
• 通過(guò)小鼠抗體產(chǎn)物（MAP）檢測(cè)進(jìn)行常規(guī)小鼠菌落病原體篩選
• 提取自不含LDEV的小鼠細(xì)胞
• 對(duì)包括LDEV在內(nèi)的多種病原體進(jìn)行廣泛的PCR檢測(cè)， 確保對(duì)生產(chǎn)過(guò)程中使用的原材料進(jìn)行嚴(yán)格控制
• 對(duì)細(xì)菌、真菌和支原體進(jìn)行檢測(cè)，確保陰性
• 使用BCA方法測(cè)定蛋白濃度
• 使用血清學(xué)方法檢測(cè)內(nèi)毒素水平
• 在37℃下進(jìn)行14天的凝膠穩(wěn)定性測(cè)試
• 每批次產(chǎn)品進(jìn)行生物學(xué)功能驗(yàn)證（類(lèi)器官培養(yǎng)與分化實(shí)驗(yàn)；皮下實(shí)驗(yàn)；干細(xì)胞培養(yǎng)；血管生成實(shí)驗(yàn)等）
• 對(duì)包括LDEV在內(nèi)的多種病原體進(jìn)行廣泛的PCR檢測(cè)， 確保對(duì)生產(chǎn)過(guò)程中使用的原材料進(jìn)行嚴(yán)格控制
使用注意事項(xiàng)
實(shí)驗(yàn)環(huán)境
• 環(huán)境溫度：20–25℃ ；環(huán)境濕度：40–60%。
• 請(qǐng)穿戴個(gè)人防護(hù)裝置，注意實(shí)驗(yàn)室安全。
溫度控制
• 基質(zhì)膠產(chǎn)品儲(chǔ)存在-20℃時(shí)是穩(wěn)定的。通過(guò)分裝并一次性使用分裝物來(lái)盡可能減少產(chǎn)品的凍融次數(shù)。在-20℃冰箱中儲(chǔ)存分裝物直到準(zhǔn)備使用。請(qǐng)不要儲(chǔ)存在無(wú)霜冰箱中。請(qǐng)務(wù)必保持產(chǎn)品的凍存狀態(tài)。
• 因?yàn)槟；镱?lèi)器官金牌基質(zhì)膠 在10℃以上會(huì)開(kāi)始凝膠化。所以需謹(jǐn)記：模基生物類(lèi)器官金牌基質(zhì)膠 和所有與?；镱?lèi)器官金牌基質(zhì)膠 接觸的培養(yǎng)皿或培養(yǎng)基都應(yīng)該預(yù)冷。在實(shí)驗(yàn)的全部過(guò)程中請(qǐng)務(wù)必保持?；镱?lèi)器官金牌基質(zhì)膠 處于冰上。
避免污染
• 實(shí)驗(yàn)操作人員需嚴(yán)格區(qū)分實(shí)驗(yàn)操作臺(tái)、清潔區(qū)和污染區(qū)，確保插取吸頭、加樣、丟棄吸頭的動(dòng)作呈單向流動(dòng)。
• 實(shí)驗(yàn)后使用含 0.5% 次氯酸的消毒液對(duì)實(shí)驗(yàn)操作區(qū)消毒。
其他
• 請(qǐng)將基質(zhì)膠產(chǎn)品小瓶淹沒(méi)在碎冰中，并放置在4℃冰箱里過(guò)夜解凍模基生物基質(zhì)膠，蛋白濃度高時(shí)可能需要更多時(shí)間。請(qǐng)將?；镱?lèi)器官金牌基質(zhì)膠 全程保持在冰上。無(wú)論是開(kāi)蓋取用產(chǎn)品或者對(duì)產(chǎn)品進(jìn)行分裝，請(qǐng)保持無(wú)菌操作。
• 操作過(guò)程中，需使用預(yù)冷的移液管輕柔地吹打混勻?；镱?lèi)器官金牌基質(zhì)膠 以確保其均勻性。將?；镱?lèi)器官金牌基質(zhì)膠 分裝到離心管中，每當(dāng)?；镱?lèi)器官金牌基質(zhì)膠 堵塞吸頭和/或移液管測(cè)量不精確時(shí)請(qǐng)更換吸頭。如果將產(chǎn)品放置在4℃的冰上 24-48個(gè)小時(shí)，凝膠化的模基生物類(lèi)器官金牌基質(zhì)膠 可能會(huì)被重新水化。
操作說(shuō)明
分裝操作說(shuō)明
基質(zhì)膠產(chǎn)品儲(chǔ)存在-20℃時(shí)是穩(wěn)定的。通過(guò)分裝并一次性使用分裝物來(lái)盡可能減少產(chǎn)品的凍融次數(shù)。以下為實(shí)驗(yàn)操作者進(jìn)行分裝操作說(shuō)明。
1.將基質(zhì)膠置于預(yù)冷盒或碎冰中，放入 4℃冰箱，過(guò)夜解凍。
2.將無(wú)菌離心管、無(wú)菌槍頭等接觸基質(zhì)膠的耗材放預(yù)冷盒中或冰箱中預(yù)冷，分裝前將融化好的基質(zhì)膠表面清潔后放入預(yù)冷盒或碎冰上。
3.在潔凈工作臺(tái)中，用1mL移液槍吸取250µL基質(zhì)膠到離心管里(或根據(jù)每次用量多少進(jìn)行分裝)，標(biāo)注好信息，操作過(guò)程中盡量保持低溫，縮短操作時(shí)間。
4.分裝完成后放冰盒中，防止傾倒，并于冰箱保存。分裝后放置于-20℃冰箱中儲(chǔ)存?zhèn)溆?。?qǐng)不要儲(chǔ)存在自動(dòng)除霜的冰箱中儲(chǔ)存。使用前將基質(zhì)膠插入預(yù)冷盒或碎冰中，并放置于4°C冰箱中，在冰上過(guò)夜解凍，使基底膜基質(zhì)膠在穩(wěn)定的低溫環(huán)境中緩慢充分融化。
使用方法說(shuō)明
包被涂層方法
?；镱?lèi)器官金牌基質(zhì)膠可以以幾種方式使用。薄層凝膠法適用于在凝膠頂部接種細(xì)胞，厚層凝膠法允許您在三維基質(zhì)內(nèi)培養(yǎng)細(xì)胞，薄層包被法(不凝膠化)給您提供了復(fù)雜的蛋白質(zhì)層，您可以在其上培養(yǎng)細(xì)胞。您的選擇基于您想要實(shí)現(xiàn)的最終結(jié)果，無(wú)論是細(xì)胞生長(zhǎng)、附著還是分化。
一、薄層凝膠法
1.依照推薦的方法解凍?；锘啄せ|(zhì)。使用預(yù)冷的移液管，將?；?基底膜基質(zhì)混合至均勻。
2.將培養(yǎng)板放置在冰上，以 50 µl/cm2 向生長(zhǎng)表面加入模基生物 基底膜基質(zhì)。
3.將培養(yǎng)板放置在 37 ℃，30 分鐘。
4.如果有必要的話(huà)，請(qǐng)?jiān)谑褂脽o(wú)血清培養(yǎng)基輕柔漂洗前吸出未結(jié)合的材料。請(qǐng)確保移液器的吸頭不要刮擦包被的表面。培養(yǎng)板現(xiàn)在可以使用了。
二、薄層包被法
1.依照推薦的方法解凍模基生物基底膜基質(zhì)。使用預(yù)冷的移液管，將?；?基底膜基質(zhì)混合至均勻。
2.使用無(wú)血清培養(yǎng)基將?；锘啄せ|(zhì)稀釋到需要的濃度。對(duì)于您的實(shí)驗(yàn)應(yīng)用，您應(yīng)該完成以經(jīng)驗(yàn)為主的研究來(lái)確定您的最適包被濃度。
3.向被包被的容器中加入稀釋的?；?基底膜基質(zhì)。加入的量應(yīng)該足以容易地覆蓋整個(gè)生長(zhǎng)表面。在室溫下培養(yǎng) 1 個(gè)小時(shí)。
4.吸出未結(jié)合的材料并使用無(wú)血清培養(yǎng)基輕柔地漂洗。培養(yǎng)板現(xiàn)在可以使用了。
三、厚層凝膠法
1.依照推薦的方法解凍模基生物基底膜基質(zhì)。使用預(yù)冷的移液管，將?；?基底膜基質(zhì)混合至均勻。
2.將培養(yǎng)板放置在冰上。向?；锘啄せ|(zhì)中加入細(xì)胞并使用預(yù)冷的移液管懸浮。以150-200µl/cm2 向生長(zhǎng)表面加入模基生物 基底膜基質(zhì)。
3.將培養(yǎng)板放置在37℃，30分鐘?，F(xiàn)在可以添加培養(yǎng)基了。細(xì)胞也可以培養(yǎng)在這一凝膠的頂部。
細(xì)胞復(fù)蘇：
使用細(xì)胞復(fù)蘇溶液在冰上 7 小時(shí)內(nèi)解聚模基生物基底膜基質(zhì)能夠?qū)崿F(xiàn)將生長(zhǎng)在?；锘啄せ|(zhì)上的細(xì)胞最有效地復(fù)蘇，或者使用中性蛋白酶，考慮到連續(xù)培養(yǎng)，中性蛋白酶作為一種金屬酶可以分散細(xì)胞。
應(yīng)用操作說(shuō)明
以下以小鼠小腸類(lèi)器官原代建立實(shí)驗(yàn)為例來(lái)進(jìn)行?；镱?lèi)器官金牌基質(zhì)膠的應(yīng)用實(shí)驗(yàn)操作說(shuō)明。
一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/strong>
1.1熟練掌握小鼠小腸類(lèi)器官原代建立技術(shù)。
1.2了解掌握小鼠多種組織來(lái)源類(lèi)器官原代建立技術(shù)。
1.3觀(guān)察記錄小鼠小腸原代類(lèi)器官生長(zhǎng)、擴(kuò)增過(guò)程中類(lèi)器官形態(tài)的變化。
二、實(shí)驗(yàn)原理
本實(shí)驗(yàn)策略采取從成體干細(xì)胞中建立和維持小鼠小腸類(lèi)器官的方法。小鼠小腸類(lèi)器官主要由干細(xì)胞、腸祖細(xì)胞和腸絨毛細(xì)胞、潘氏細(xì)胞、杯狀細(xì)胞和少量腸內(nèi)分泌細(xì)胞組成，在自我更新能力、組織結(jié)構(gòu)、細(xì)胞類(lèi)型和功能方面，小鼠小腸類(lèi)器官重現(xiàn)了體內(nèi)小腸上皮的特征，因此是腸道穩(wěn)態(tài)和疾病機(jī)制研究的理想體外模型。
三、實(shí)驗(yàn)儀器、材料、試劑
1、儀器：生物安全柜、細(xì)胞培養(yǎng)箱、低溫水平式離心機(jī)、倒置顯微鏡、低溫冰箱、搖床
2、材料：細(xì)胞培養(yǎng)板（規(guī)格為 24 孔、48 孔和 96 孔）、離心管（規(guī)格為 1.5 mL、15 mL 和 50 mL）、細(xì)胞培養(yǎng)皿（直徑規(guī)格為 2.5 cm、6 cm和10 cm）、移液器（規(guī)格為 2.5 μL、10 μL、20 μL、200 μL、1000 μL 和 5000 μL）、無(wú)菌吸頭（規(guī)格為 10 μL、200 μL 和 1000 μL）、無(wú)菌鑷子、無(wú)菌組織剪、70μm細(xì)胞過(guò)濾器、手術(shù)刀片
3、實(shí)驗(yàn)試劑：小鼠小腸類(lèi)器官培養(yǎng)試劑盒、EDTA (0.5M, pH 8.0) 、潤(rùn)洗液、基礎(chǔ)培養(yǎng)基、基質(zhì)膠、DPBS
四、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容與方法
4.1 實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備：
Ø 小鼠小腸類(lèi)器官培養(yǎng)試劑盒、基質(zhì)膠4℃化凍
Ø 小鼠小腸類(lèi)器官完全培養(yǎng)基的制備：將200μL Mouse Intestinal Organoid Supplement B (50x)，40μL Mouse Intestinal Organoid Supplement C (250x) 加至 9.76mL Mouse Intestinal Organoid Basal Medium 中，充分混合，配制成 10mL 小鼠小腸類(lèi)器官完全培養(yǎng)基。 室溫平衡，可在 2-8°C 儲(chǔ)存，建議在兩周內(nèi)使用。
Ø 準(zhǔn)備足量添加1%雙抗的DPBS
Ø 準(zhǔn)備足量添加0.1%BSA的DPBS
Ø 配制5mM EDTA溶液：4mL預(yù)冷DPBS溶液加40μL 0.5M EDTA溶液pH8.0，置冰上備用。
4.2 取樣：小鼠斷頸處死，表面噴灑酒精殺菌。在無(wú)菌條件下取出近胃端3~10cm腸組織，用鑷子去除腸道外部的腸系膜、脂肪，放入4℃預(yù)冷的含雙抗的DPBS溶液中。
4.3 清洗：使用手術(shù)剪將腸管剪開(kāi)，腸腔面朝上，一只手使用手術(shù)鑷夾住腸組織一端，另一只手使用手術(shù)刀片輕輕刮去腸腔表面腸絨毛，待腸絨毛被刮凈后，將腸組織置于新的含 DPBS 的培養(yǎng)皿中清洗，重復(fù)清洗2次。 將清洗后的小腸組織剪碎至2mm寬，轉(zhuǎn)移至新的培養(yǎng)皿中，用DPBS清洗2遍。
4.4 消化：將清洗好的腸段轉(zhuǎn)移至含有5mmol/L EDTA 的預(yù)冷 DPBS 中消化，置于4℃孵育20~30min，消化20分鐘可用移液器輕柔吹打腸段，取上清顯微鏡下觀(guān)察，待上清出現(xiàn)完整隱窩即可終止消化，若無(wú)隱窩可適當(dāng)延長(zhǎng)消化時(shí)間。
4.5 清洗：消化完成后，將組織碎片轉(zhuǎn)移到新的含 DPBS 的培養(yǎng)皿中清洗，重復(fù)2次以去除 EDTA。
4.6 重懸：用 5mL 移液管在預(yù)冷的0.1%BSA的DPBS的培養(yǎng)皿或 50mL 離心管中吹打、重懸組織碎片，使組織反復(fù)穿過(guò)移液管尖以產(chǎn)生機(jī)械剪切力從而使隱窩與基底層分離，取一部分懸液鏡檢，當(dāng)可以看到大量的隱窩樣結(jié)構(gòu)后，停止吹打，并對(duì)吹打后的組織懸液進(jìn)行70μm濾網(wǎng)過(guò)濾。
4.7 收集：收集穿過(guò)濾網(wǎng)的組織懸液，300g 離心力 4℃離心3min。
4.8 計(jì)數(shù)：棄上清，使用1mL0.1%BSA的DPBS重懸組織沉淀，取20μL 懸液進(jìn)行鏡檢和隱窩計(jì)數(shù)，計(jì)數(shù)完成后吸取包含所需隱窩量的懸液，300g 離心力 4℃離心3min，棄上清后置于冰上。
4.9 用適量的Matrigengel Matrix重懸組織沉淀，推薦重懸密度為每10μL Matrigengel Matrix懸液包含70至100個(gè)隱窩，重懸后置于冰上，重懸時(shí)間不超過(guò)30s以避免Matrigengel Matrix過(guò)早凝固。
注意： Matrigengel Matrix稀釋比例應(yīng)在70%以上以保證培養(yǎng)過(guò)程中Matrigengel Matrix的結(jié)構(gòu)穩(wěn)定性。
4.10 將 Matrigengel Matrix和組織細(xì)胞的混合懸液點(diǎn)入24孔板底部正中央，每孔 30μL 左右，避免懸液接觸孔板側(cè)壁。
注意：為防止 Matrigengel Matrix室溫凝固，此步驟應(yīng)盡快完成。
4.11 將接種完成后的培養(yǎng)板至于 37℃二氧化碳恒溫培養(yǎng)箱中，孵育 15min 左右待 Matrigengel Matrix 凝固。
待 Matrigengel Matrix完全凝固后，沿壁緩慢加入已配制好的小鼠小腸類(lèi)器官完全培養(yǎng)基，24孔板每孔500μL，避免破壞已凝固結(jié)構(gòu)。
4.12將24孔板置于 37℃二氧化碳培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
4.13每3天更換一次培養(yǎng)基，更換培養(yǎng)基時(shí)應(yīng)避免破壞 Matrigengel Matrix。
4.14密切監(jiān)測(cè)類(lèi)器官生長(zhǎng)狀態(tài)，理想情況下，小鼠小腸類(lèi)器官應(yīng)在5至7天內(nèi)建成。
- 上一頁(yè)： 干細(xì)胞金牌基質(zhì)膠
- 下一頁(yè)： Bambanker DMSO-free無(wú)血清無(wú)DMSO細(xì)胞凍存液