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淀粉測(cè)定方法分為酸水解法和酶分析法。酸水解只能應(yīng)用干純淀粉樣品。酶分析方法在前外理步驟淀粉凝膠化、液化和糊化糊精水解成葡萄糖，葡萄糖測(cè)定步驟等方面存在不同。AACC76-11法采用淀粉在高壓蒸汽滅菌鍋中及含水的條件下凝膠化，并用淀粉葡糖苷酶將淀粉轉(zhuǎn)化為葡萄糖，再測(cè)定葡萄糖含量，采用AACC76-11法會(huì)導(dǎo)致許多樣品和材料中包括高直鏈淀粉玉米淀粉和谷物制品淀粉含量檢測(cè)結(jié)果偏低。近來(lái)，我們將檢測(cè)方法進(jìn)行了改進(jìn)，使耐熱a-淀粉酶和淀粉葡糖苷酶可以在相同的pH(pH5.0)下進(jìn)行孵育，這樣簡(jiǎn)化了測(cè)定步驟，并將麥芽酮糖生成的可能性降到最低。淀粉總量試劑盒可測(cè)定大部分食品、飼料、植物和谷物制品(天然或加工過(guò)的)對(duì)于大部分樣品(如小麥粉)樣品中的淀粉在孵育中(大約100℃并加入耐熱a-淀粉酶)會(huì)完全溶解含有大量抗性淀粉的樣品(如高直鏈玉米淀粉)需用1.7M  NaOH或熱DMSO進(jìn)行預(yù)溶解。含有可溶性淀粉或麥芽糊精的樣品，不需要用耐熱-淀粉酶處理。

產(chǎn)品性能

特異性:可用于測(cè)定-葡聚糖(包括淀粉、糖原、植物糖原和非抗性麥芽糊精)

靈敏度:最小吸光度差異為0.010吸光度單位。這相當(dāng)于當(dāng)樣品體積為100mL時(shí)，D-葡萄糖的濃度為1.0mg/L或淀粉濃度為0.9mg/L。

檢測(cè)限:2.0mgD-葡萄糖(18mg淀粉)/L(在最大樣品體積為100mL，吸光度差異為0.020時(shí)得到)。

檢測(cè)范圍:5-100ugD-葡萄糖，重復(fù)檢測(cè)同一樣品溶液其吸光度值會(huì)有0.005-0010吸光度單位的差異，這相當(dāng)于樣品體積為1.00mL時(shí)，樣品溶液中D-葡萄糖濃度0.05-10mg/L。如果樣品經(jīng)過(guò)稀釋?zhuān)?jì)算結(jié)果時(shí)需要乘以相應(yīng)的稀釋系數(shù)(F)，如果在樣品制備階段，樣品稱(chēng)量時(shí)，如10g/L，可能會(huì)產(chǎn)生0.02-0.05g/100g的差異。

檢測(cè)原理

耐熱a-淀粉酶將淀粉水解為可溶性有支鏈和無(wú)支鏈的麥芽糊精(1)

(a-淀粉酶，pH7.0或50-100℃)

(1)淀粉+H₂O                                   麥芽糊精

如果需要(如含大量抗性淀粉的樣品)，可向樣品中加入的2MKOH并攪拌，在4℃下使抗性淀粉預(yù)溶解，然后用醋酸鈉緩沖液中和，再用-淀粉酶處理(2)。也可在100℃下，用的DMSO溶解。

(KOH再中和+a-淀粉酶）

(2) 抗性淀粉+H₂O                               麥芽糊精

淀粉葡糖苷酶(AMG)將麥芽糊精定量水解成D-葡萄糖

(AMG)

(3)麥芽糖精               D-葡萄糖

D-葡萄糖被氧化成D-葡萄酸鹽，并釋放一摩爾H₂O₂，再用過(guò)氧化物酶催化H₂O₂反應(yīng)，產(chǎn)生的昆亞胺染料含量用比色法測(cè)定。

(葡萄糖氧化酶)

(4) D-葡萄糖+O₂+ H₂O                     D-葡萄糖酸鹽+H₂O₂

(過(guò)氧化物酶)

(5)2H₂O+對(duì)羥基苯甲酸+4-氨基安替比林                   昆亞胺染料+4H₂O

如果樣品中含高水平的D-葡萄糖和麥芽糊精，可在測(cè)定前用含水乙醇(80%v/v)處理。一個(gè)樣品可以在70分鐘完成。2小時(shí)內(nèi)可以完成20個(gè)樣品檢測(cè)。

保存條件：

未配制前在規(guī)定存儲(chǔ)條件下6個(gè)月內(nèi)有效，配制使用后在規(guī)定存儲(chǔ)條件下3個(gè)月內(nèi)有效。（各組分詳細(xì)儲(chǔ)存條件見(jiàn)瓶身）

試劑盒組成與配置：

1. 所需的儀器和用品：

2. 可見(jiàn)分光光度計(jì)、10mm玻璃比色皿、水浴鍋、可調(diào)式移液器、冰、離心機(jī)、開(kāi)水浴、磁力攪拌器

2. 需配試劑：

a、 醋酸鈉緩沖液（100 mM，pH 5.0）加二水合氯化鈣（5 mM）：在900 mL蒸餾水中加入5.8 mL冰醋酸（1.05 g/mL）。通過(guò)添加1 M（4 g/100 mL）氫氧化鈉溶液（需要大約30 mL），將pH值調(diào)節(jié)到5.0，后加入0.74 g二水合氯化鈣并溶解，將容量調(diào)節(jié)至1L，并在4°C下儲(chǔ)存緩沖液。（在4°C下穩(wěn)定>6個(gè)月）

b、 醋酸鈉緩沖液（200mm，pH 4.5）加二水合氯化鈣（5 mM）：向900 mL蒸餾水中添加11.6 mL冰醋酸（1.05 g/mL），加入0.74 g二水氯化鈣并溶解，通過(guò)添加1 M（4 g/100 mL）氫氧化鈉溶液（需要大約60 mL），將pH值調(diào)整為4.5，將容液定容至1L。（在4°C下穩(wěn)定>6個(gè)月）

c、 醋酸鈉緩沖液（600 mM，pH 3.8）加二水合氯化鈣（5 mM）：向1600 mL蒸餾水中添加69.6 mL冰醋酸（1.05 g/mL），并使用4 M氫氧化鈉將pH值調(diào)節(jié)至3.8，再添加1.48 g二水氯化鈣并溶解，用蒸餾水將體積調(diào)節(jié)到2L。（室溫下穩(wěn)定>12個(gè)月）

d、 氫氧化鈉溶液（1.7 M）：稱(chēng)取68g氫氧化鈉，加入900mL去離子水，攪拌溶解，將容量調(diào)整為1L并儲(chǔ)存在密封容器中。（在室溫下穩(wěn)定2年以上）

e、 MOPS緩沖液(50mM,pH7.0)+氯化鈣(5mM) +疊氮化鈉(0.02%)（僅用于c和d分析樣品）

取11.55g MOPS(鈉鹽, Sigma cat. M-9381)加入900mL蒸餾水, 用1M(10%V/V)HCl調(diào)節(jié)pH到7.0（大約需要17mL）， 稱(chēng)取二水合氯化鈣0.74g和疊氮化鈉0.2g 完全溶解, 然后調(diào)整到1L。（4°C下保存6個(gè)月）            注：在調(diào)整pH值之前，不得添加疊氮化鈉，疊氮化鈉酸化釋放出有毒氣體。

淀粉含量測(cè)定：

（a） 不含抗性淀粉的谷物和食品中淀粉的測(cè)定（推薦程序：pH值5.0的所有培養(yǎng)）

1.碾磨谷物、植物或食品，以通過(guò)0.5毫米的篩網(wǎng)；

2.準(zhǔn)確稱(chēng)取100 mg供試品，一式兩份（一份作為樣品空白）放入試管中并記錄準(zhǔn)確的重量，輕敲試管，使樣本落到試管底部；

3.向兩根試管中加入10mL醋酸鈉緩沖液（100mM，pH 5.0）和氯化鈣（5mM），在渦流混合器上用力攪拌管子5秒；

4.向其中一個(gè)試管（樣品管）中添加0.1 mL未稀釋的試劑一，向第二根試管（樣品空白）中加入0.1mL醋酸鈉緩沖液（100mM，pH 5.0）和氯化鈣（5mM）；

5.旋渦管3秒，松散地蓋住管，立即將其轉(zhuǎn)移到沸水浴中并啟動(dòng)計(jì)時(shí)器，大約2分鐘后，擰緊瓶蓋，在渦流混合器上用力混合試管內(nèi)容物，再過(guò)5分鐘后，再次將試管內(nèi)容物旋渦5秒，然后將試管放回沸水浴中15分鐘，從沸水浴中取出試管，在渦流混合器上劇烈攪拌5秒鐘。將管子放在50°C的水浴中，使其平衡到超過(guò)5分鐘的溫度；

6.向其中一個(gè)試管（樣品管）中添加0.1 mL未稀釋試劑二，渦流3秒。向第二根試管（樣品空白）中添加0.1 mL醋酸鈉緩沖液（100 mM pH 5.0）和氯化鈣（5 mM），在50°C下培養(yǎng)試管30分鐘，無(wú)需進(jìn)一步混合；

7. 從水浴槽中取出管子，使其冷卻到室溫10分鐘以上，將管子倒置幾次，以確保蓋子內(nèi)側(cè)的冷凝水與管內(nèi)的液體混合；

8. 向試管（樣品和空白樣品）內(nèi)各取出2.0 mL溶液轉(zhuǎn)移到微型膠管中，并以13000 rpm的轉(zhuǎn)速離心試管5分鐘并靜置5分鐘，準(zhǔn)確取1.0 mL的上清液轉(zhuǎn)移到7mL試管中，加入4 mL醋酸鈉緩沖液（100 mM，pH 5.0）和氯化鈣（5 mM），并混合內(nèi)容物；

9.  準(zhǔn)確取出每份試管內(nèi)（樣品和空白樣品）的溶液的0.1 mL；

10.  添加3.0 mL GOPOD試劑，在50°C下培養(yǎng)20分鐘，反應(yīng)結(jié)束后將3mL液體轉(zhuǎn)移至玻璃比色皿中，于510nm處讀數(shù)；

同時(shí)孵化：

血糖控制：0.1 mL葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液（1.0 mg/mL）加3.0 mL GOPOD試劑，一式四份；

試劑空白：0.1 mL乙酸鈉緩沖液（100 mM，pH 5.0）加氯化鈣（5 mM）和3.0 mL GOPOD試劑，一式兩份。

11.    計(jì)算淀粉含量。

注：對(duì)于本提取方案，最終提取體積（EV）=10.2   稀釋度（D）=1、5或11

注1：如果樣品的吸光度值小于0.100，分析離心樣品溶液（步驟8），無(wú)需進(jìn)一步稀釋。如果吸光度值大于1.20，則將1.0 mL離心樣品溶液加入10.0 mL醋酸鈉緩沖液（100 mM，pH 5.0）加氯化鈣（5 mM）混合均勻，然后取出0.1 mL等分試樣，使用GOPOD試劑進(jìn)行分析。對(duì)于淀粉含量小于1%（w/w）的樣品，將樣品尺寸增加至500 mg，并分析0.1 mL未稀釋樣品溶液。（稀釋度（D）=1、5或11）

注2：當(dāng)分析草和青貯飼料等纖維樣品時(shí)，使用攪拌機(jī)研磨樣品，研磨約60秒（直到樣品均勻?yàn)橹梗?。分?/span>500 mg樣品（精確稱(chēng)重）。根據(jù)實(shí)施例“a”培養(yǎng)，但在100°C下用耐熱α-淀粉酶將培養(yǎng)時(shí)間延長(zhǎng)至60分鐘。在使用AMG培養(yǎng)并冷卻至室溫后，對(duì)于含有約20-30%淀粉的青貯飼料樣品，在蒸餾水中稀釋20倍的小份（1 mL），充分混合，以13000 rpm的轉(zhuǎn)速離心分離小份（2 mL）5分鐘，并且用GOPOD試劑培養(yǎng)0.1 mL等分試樣，一式兩份。（稀釋度（D）=20）

（b） 含抗性淀粉樣品總淀粉含量的測(cè)定（RTS-NaOH程序-推薦）。

1.準(zhǔn)確稱(chēng)取100 mg試樣，一式兩份，放入試管中，并記錄準(zhǔn)確的重量，輕敲試管，使樣本落到試管底部；

2.將80%的乙醇完全分散在混合管中，這是一個(gè)非常重要的步驟；

3.使用移液器添加2ml  1.7M氫氧化鈉溶液，并在渦流混合器上攪拌試管內(nèi)容物15秒，將試管放在冰水浴架上的磁力攪拌器上攪拌15分鐘。在此期間，也間歇地在渦流混合器上劇烈攪拌管內(nèi)的物質(zhì)2-3次,確保樣品漿液中沒(méi)有結(jié)塊；

4.使用移液器添加8 mL醋酸鈉緩沖液（600 mM，pH 3.8）和氯化鈣（5 mM）,在渦流混合器上攪拌管子,確保pH值約為5.0；

5.立即在樣品管中添加0.1 mL未稀釋的試劑一，然后再添加0.1 mL試劑二。向第二根試管（樣品空白）中添加0.2 mL醋酸鈉緩沖液（100 mM，pH 5.0）和氯化鈣（5 mM），蓋住兩個(gè)試管并使內(nèi)容物渦流3秒；

6.試管在50°C下培養(yǎng)30分鐘；

7.從水浴槽中取出管子，讓它們冷卻到室溫，將管子倒置幾次，以確保蓋子內(nèi)側(cè)的冷凝水與管內(nèi)的液體混合；

8. 向試管（樣品和空白樣品）內(nèi)各取出2.0 mL溶液轉(zhuǎn)移到微型膠管中，并以13000 rpm的轉(zhuǎn)速離心試管5分鐘并靜置5分鐘，準(zhǔn)確取1.0 mL的上清液轉(zhuǎn)移到7mL試管中，試管中含有4 mL醋酸鈉緩沖液（100 mM，pH 5.0）和氯化鈣（5 mM），并混合內(nèi)容物；

9.  準(zhǔn)確取出每份試管內(nèi)（樣品和空白樣品）的溶液的0.1 mL；

10. 添加3.0 mL GOPOD試劑，在50°C下培養(yǎng)20分鐘，反應(yīng)結(jié)束后將3mL液體轉(zhuǎn)移至玻璃比色皿中，于510nm處讀數(shù)。

同時(shí)孵化：

血糖控制：0.1 mL葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液（1.0 mg/mL）加3.0 mL GOPOD試劑，一式四份。

試劑空白：0.1 mL乙酸鈉緩沖液（100 mM，pH 5.0）加氯化鈣（5 mM）和3.0 mL GOPOD試劑，一式兩份。

注：對(duì)于本提取方案，最終提取體積（EV）=10.4   稀釋度（D）=1、5或11

注1：如果樣品的吸光度值小于0.100，分析離心樣品溶液（步驟8），無(wú)需進(jìn)一步稀釋。如果吸光度值大于1.20，則將1.0 mL離心樣品溶液加入10.0 mL醋酸鈉緩沖液（100 mM，pH 5.0）加氯化鈣（5 mM）混合均勻，然后取出0.1 mL等分試樣，使用GOPOD試劑進(jìn)行分析。對(duì)于淀粉含量小于1%（w/w）的樣品，將樣品尺寸增加至500 mg，并分析0.1 mL未稀釋樣品溶液。稀釋度（D）=1、5或11

（c） 不含抗性淀粉、D-葡萄糖和/或麥芽糊精的谷物和食品中淀粉的測(cè)定（AOAC官方方法996.11）。

1.碾磨谷物、植物或食品，以通過(guò)0.5毫米的篩網(wǎng)；

2.準(zhǔn)確稱(chēng)取100 mg試樣，放入試管中，并記錄準(zhǔn)確的重量，輕敲試管，使樣本落到試管底部；

3.加入0.2ml水乙醇（80%v/v）潤(rùn)濕樣品并協(xié)助分散，在渦流混合器上攪拌管子；

4.立即添加3 mL稀釋后的試劑一（將試劑一用MOPS緩沖液（50 mM，pH 7.0）和氯化鈣（5 mM）稀釋30倍），將試管放入沸水浴中孵育6分鐘，2分鐘、4分鐘和6分鐘后劇烈旋轉(zhuǎn)（以確保完全均勻）；

5. 將試管置于50°C的槽中，溫育5min，加入4 mL醋酸鈉緩沖液（200 mM，pH 4.5）和氯化鈣（5 mM），然后加入0.1mL試劑二，在渦流混合器上攪拌試管，并在50°C下培養(yǎng)30分鐘；

6. 將試管中的全部?jī)?nèi)容物轉(zhuǎn)移到100 mL容量瓶中（有漏斗輔助），使用洗瓶徹底沖洗試管內(nèi)的內(nèi)容物，用醋酸鈉緩沖液（200 mM，pH 4.5）和氯化鈣（5 mM）調(diào)節(jié)至體積，并將內(nèi)容物充分混合；

7. 向試管內(nèi)取出2.0 mL溶液轉(zhuǎn)移到微型膠管中，并以13000 rpm的轉(zhuǎn)速離心試管5分鐘并靜置5分鐘；

8.準(zhǔn)確取出試管內(nèi)的溶液的0.1 mL；

9. 添加3.0 mL GOPOD試劑，在50°C下培養(yǎng)20分鐘，反應(yīng)結(jié)束后將3mL液體轉(zhuǎn)移至玻璃比色皿中，于510nm處讀數(shù)；

同時(shí)孵化：

血糖控制：0.1 mL葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液（1.0 mg/mL）加3.0 mL GOPOD試劑，一式四份；

試劑空白：0.1 mL乙酸鈉緩沖液（100 mM，pH 5.0）加氯化鈣（5 mM）和3.0 mL GOPOD試劑，一式兩份。

注：對(duì)于本提取方案，最終提取體積（EV）=100  稀釋度（D）=1

（d） 測(cè)定含有抗性淀粉但不含d-葡萄糖和/或麥芽糊精的樣品的總淀粉含量（DMSO格式-AOAC官方方法996.11）。

1.碾磨谷物、植物或食品，以通過(guò)0.5毫米的篩網(wǎng)；

2.將研磨好的樣品（約100mg，精確稱(chēng)重）添加到試管中；

3.用0.2 mL含水乙醇（80%v/v）潤(rùn)濕，以幫助分散，并在渦流混合器上攪拌管；

4.立即加入2mL二甲基亞砜（DMSO），并在渦流混合器上攪拌試管，將試管放入沸水浴中，5分鐘后取出；

5.立即添加3 mL稀釋后的試劑一（將試劑一用MOPS緩沖液（50 mM，pH 7.0）和氯化鈣（5 mM）稀釋30倍），將試管放入沸水浴中孵育6分鐘，2分鐘、4分鐘和6分鐘后劇烈旋轉(zhuǎn)（以確保完全均勻）；

6. 將試管置于50°C的槽中；加入4 mL醋酸鈉緩沖液（200 mM，pH 4.5）和氯化鈣（5 mM），然后加入0.1mL試劑二，在渦流混合器上攪拌試管，并在50°C下培養(yǎng)30分鐘；

7. 將試管中的全部?jī)?nèi)容物轉(zhuǎn)移到100 mL容量瓶中（有漏斗輔助）。使用洗瓶徹底沖洗試管內(nèi)的內(nèi)容物，用醋酸鈉緩沖液（200 mM，pH 4.5）和氯化鈣（5 mM）調(diào)節(jié)至體積，并將內(nèi)容物充分混合；

8. 向試管內(nèi)取出2.0 mL溶液轉(zhuǎn)移到微型膠管中，并以13000 rpm的轉(zhuǎn)速離心試管5分鐘并靜置5分鐘；

9.準(zhǔn)確取出試管內(nèi)的溶液的0.1 mL；

10.    添加3.0 mL GOPOD試劑，在50°C下培養(yǎng)20分鐘，反應(yīng)結(jié)束后將3mL液體轉(zhuǎn)移至玻璃比色皿中，于510nm處讀數(shù)。

同時(shí)孵化：

血糖控制：0.1 mL葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液（1.0 mg/mL）加3.0 mL GOPOD試劑，一式四份。

試劑空白：0.1 mL乙酸鈉緩沖液（100 mM，pH 5.0）加氯化鈣（5 mM）和3.0 mL GOPOD試劑，一式兩份。

注：對(duì)于本提取方案，最終提取體積（EV）=100  稀釋度（D）=1

（e） 測(cè)定含有D-葡萄糖和/或麥芽糊精的樣品中淀粉的建議程序.用酒精洗滌去除D-葡萄糖和麥芽糊精。

[注：麥芽糊精在乙醇水溶液中的溶解度主要取決于麥芽糊精的DP范圍、最終乙醇濃度和溶液溫度]。

1.碾磨谷物、植物或食品，以通過(guò)0.5毫米的篩網(wǎng)；

2.向玻璃離心管（16 x 100 mm；14 mL容量）中添加研磨樣品（約100 mg，精確稱(chēng)重）；

3. 添加5.0 mL含水乙醇（80%v/v）并在80-85°C下培養(yǎng)5分鐘，在渦流攪拌器上混合內(nèi)容物，并添加另5 mL 80%v/v水乙醇；

4.在臺(tái)式離心機(jī)上，以3250 rcf離心試管10分鐘，丟棄上清液；

5.加5 mL 80%v/v含水乙醇中重新懸浮顆粒，并在渦流混合器上攪拌，再加入5ml 80%v/v含水乙醇，倒置混合，按照步驟4離心，并小心地倒出上清液；

6.立即添加3 mL稀釋后的試劑一（將試劑一用MOPS緩沖液（50 mM，pH 7.0）和氯化鈣（5 mM）稀釋30倍），將試管放入沸水浴中孵育6分鐘，2分鐘、4分鐘和6分鐘后劇烈旋轉(zhuǎn)（以確保完全均勻）；

7. 將試管置于50°C的槽中，溫育5min，加入4 mL醋酸鈉緩沖液（200 mM，pH 4.5）和氯化鈣（5 mM），然后加入0.1mL試劑二，在渦流混合器上攪拌試管，并在50°C下培養(yǎng)30分鐘；

8. 將試管中的全部?jī)?nèi)容物轉(zhuǎn)移到100 mL容量瓶中（有漏斗輔助），使用洗瓶徹底沖洗試管內(nèi)的內(nèi)容物，用醋酸鈉緩沖液（200 mM，pH 4.5）和氯化鈣（5 mM）調(diào)節(jié)至體積，并將內(nèi)容物充分混合；

9. 向試管內(nèi)取出2.0 mL溶液轉(zhuǎn)移到微型膠管中，并以13000 rpm的轉(zhuǎn)速離心試管5分鐘并靜置5分鐘；

10.準(zhǔn)確取出試管內(nèi)的溶液的0.1 mL；

11.  添加3.0 mL GOPOD試劑，在50°C下培養(yǎng)20分鐘，反應(yīng)結(jié)束后將3mL液體轉(zhuǎn)移至玻璃比色皿中，于510nm處讀數(shù)。

同時(shí)孵化：

血糖控制：0.1 mL葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液（1.0 mg/mL）加3.0 mL GOPOD試劑，一式四份；

試劑空白：0.1 mL乙酸鈉緩沖液（100 mM，pH 5.0）加氯化鈣（5 mM）和3.0 mL GOPOD試劑，一式兩份。

注：對(duì)于本提取方案，最終提取體積（EV）=100  稀釋度（D）=1

（f） 淀粉以可溶性或懸浮形式存在的樣品中淀粉的測(cè)定

1.通過(guò)在旋渦混合器上攪拌或通過(guò)倒置，徹底混合樣品內(nèi)容物。如有必要，加熱或均質(zhì)樣品以獲得均勻懸浮液；

2.立即使用移液器將樣品和樣品空白轉(zhuǎn)移到試管中，在每根試管中加入5ml醋酸鈉緩沖液（200mm，pH4.5）和氯化鈣（5mm），在渦流混合器上用力攪拌管子5秒；

3.   向其中一個(gè)試管（樣品管）中添加0.1 mL未稀釋的試劑一，向第二根試管（樣品空白）中加入0.1mL醋酸鈉緩沖液（100mM，pH 5）和氯化鈣（5mM）；

4.   旋渦管3秒，松散地蓋住管，立即將其轉(zhuǎn)移到沸水浴中并啟動(dòng)計(jì)時(shí)器。大約2分鐘后，擰緊瓶蓋，在渦流混合器上用力混合試管內(nèi)容物。再過(guò)5分鐘后，再次將試管內(nèi)容物旋渦5秒，然后將試管放回沸水浴中15分鐘，從沸水浴中取出試管，在渦流混合器上劇烈攪拌5秒鐘。將管子放在50°C的水浴中，使其平衡到超過(guò)5分鐘的溫度；

5.    向其中一個(gè)試管（樣品管）中添加0.1 mL未稀釋試劑二，渦流3秒，向第二根試管（樣品空白）中添加0.1 mL醋酸鈉緩沖液（100 mM pH 5.0）和氯化鈣（5 mM），在50°C下培養(yǎng)試管30分鐘，無(wú)需進(jìn)一步混合；

6.    從水浴槽中取出管子，使其冷卻到室溫10分鐘以上。將管子倒置幾次，以確保蓋子內(nèi)側(cè)的冷凝水與管內(nèi)的液體混合；

8.  向試管（樣品和空白樣品）內(nèi)各取出2.0 mL溶液轉(zhuǎn)移到微型膠管中，并以13000 rpm的轉(zhuǎn)速離心試管5分鐘并靜置5分鐘，準(zhǔn)確取1.0 mL的上清液轉(zhuǎn)移到7mL試管中，試管中含有4 mL醋酸鈉緩沖液（100 mM，pH 5.0）和氯化鈣（5 mM），并混合內(nèi)容物；

9.  準(zhǔn)確取出每份試管內(nèi)（樣品和空白樣品）的溶液的0.1 mL；

10.  添加3.0 mL GOPOD試劑，在50°C下培養(yǎng)20分鐘，反應(yīng)結(jié)束后將3mL液體轉(zhuǎn)移至玻璃比色皿中，于510nm處讀數(shù)。

同時(shí)孵化：

血糖控制：0.1 mL葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液（1.0 mg/mL）加3.0 mL GOPOD試劑，一式四份。

試劑空白：0.1 mL乙酸鈉緩沖液（100 mM，pH 5.0）加氯化鈣（5 mM）和3.0 mL GOPOD試劑，一式兩份。

        稀釋樣品體積（DSV）=10.2 mL  釋度（D）=1、5或11  樣品體積（SV）=5mL

注1：如果樣品的吸光度值小于0.100，分析離心樣品溶液（步驟8），無(wú)需進(jìn)一步稀釋。如果吸光度值大于1.20，則將1.0 mL離心樣品溶液加入10.0 mL醋酸鈉緩沖液（100 mM，pH 5.0）加氯化鈣（5 mM）混合均勻，然后取出0.1 mL等分試樣，使用GOPOD試劑進(jìn)行分析。對(duì)于淀粉含量小于1%（w/w）的樣品，將樣品尺寸增加至500 mg，并分析0.1 mL未稀釋樣品溶液。稀釋度（D）=1、5或11

（g） 懸浮態(tài)含抗性淀粉樣品中淀粉含量的測(cè)定

1.通過(guò)在旋渦混合器上攪拌或通過(guò)倒置，徹底混合樣品內(nèi)容物。如有必要，可獲得均勻懸浮液；

2.立即使用移液器分試樣一式兩份移入兩個(gè)試管中，在渦流混合器上攪拌試管內(nèi)容物15秒，將試管放在冰水浴架上的磁力攪拌器上攪拌15分鐘，在此期間，也間歇地在渦流混合器上劇烈攪拌管中的內(nèi)容物2-3次，確保樣品漿液中沒(méi)有結(jié)塊；

3.使用移液器添加8 mL醋酸鈉緩沖液（600 mM，pH 3.8）和氯化鈣（5 mM），在渦流混合器上攪拌管子，確保pH值約為5.0；

4.立即樣品管中添加0.1 mL未稀釋的試劑一，然后再添加0.1 mL試劑二，向第二根試管（樣品空白）中添加0.2 mL醋酸鈉緩沖液（100 mM，pH 5.0）和氯化鈣（5 mM），蓋住兩個(gè)試管并使內(nèi)容物渦流3秒；

5.試管在50°C下培養(yǎng)30分鐘；

6.從水浴槽中取出管子，讓它們冷卻到室溫，將管倒置幾次，以確保蓋子內(nèi)側(cè)的冷凝水與管內(nèi)的液體混合；  

7.向試管（樣品和空白樣品）內(nèi)各取出2.0 mL溶液轉(zhuǎn)移到微型膠管中，并以13000 rpm的轉(zhuǎn)速離心試管5分鐘并靜置5分鐘，準(zhǔn)確取1.0 mL的上清液轉(zhuǎn)移到7mL試管中，試管中含有4 mL醋酸鈉緩沖液（100 mM，pH 5.0）和氯化鈣（5 mM），并混合內(nèi)容物；

8.  準(zhǔn)確取出每份試管內(nèi)（樣品和空白樣品）的溶液的0.1 mL；

9.  添加3.0 mL GOPOD試劑，在50°C下培養(yǎng)20分鐘，反應(yīng)結(jié)束后將3mL液體轉(zhuǎn)移至玻璃比色皿中，于510nm處讀數(shù)。

同時(shí)孵化：

血糖控制：0.1 mL葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液（1.0 mg/mL）加3.0 mL GOPOD試劑，一式四份。

試劑空白：0.1 mL乙酸鈉緩沖液（100 mM，pH 5.0）加氯化鈣（5 mM）和3.0 mL GOPOD試劑，一式兩份。

      稀釋樣品體積（DSV）=12.2 m      稀釋度（D）x 1、5或11；樣品體積（SV）=2 mL

計(jì)算：

1.固體樣品的計(jì)算（mg）：

淀粉，%  =  ΔA × F×（EV÷0.1）×（1÷1000）×D×（100÷W）×（162÷180）

=ΔA x F x EV x D x 0.90

             W

ΔA=相當(dāng)于試劑空白讀取的吸光光度值(反應(yīng)) ；       

F =吸光光度值轉(zhuǎn)換為葡萄糖(ug)的因子（100(D-葡萄糖的重量ug÷100μgD-葡萄糖的吸光光度值）；

EV=最終體積樣品提取量:程序（a）為10.2 mL，程序（b）為10.4mL，（c）和（d）為100mL;                  0.1=用于檢測(cè)的樣品體積；      （1÷1000）=1從ug到mg的轉(zhuǎn)換；

（100÷W）=一定重量干粉中淀粉含量以百分比表述的因子； （162÷180）=淀粉中游離的D-葡萄糖轉(zhuǎn)化為D-葡萄糖酐的的因子180；               D=樣品溶液的進(jìn)一步稀釋?zhuān)ㄎ聪♂尰蛳♂?/span>5倍或11倍）     

淀粉%W/W(干重)=淀粉%W/W(上述算法結(jié)果)x 100÷（100-含水量(%W/W))

2.液體樣品的計(jì)算（mg/100 mL）：

淀粉 = ΔA x F x DSV  x 100  x  1 x  162  x D

SV    0.1   1000   180

= ΔA x F x DSV÷SV x 0.9

ΔA=相當(dāng)于試劑空白讀取的吸光光度值(反應(yīng)) ；       

F =吸光光度值轉(zhuǎn)換為葡萄糖(ug)的因子（100(D-葡萄糖的重量ug÷100μgD-葡萄糖的吸光光度值）；

DSV=稀釋樣品體積（即加入醋酸鹽緩沖液+α-淀粉酶和AMG后的樣品體積）；

SV=分析用樣品的體積（例如（f）為5 mL，示例（g）為2 mL；  100=換算成100mL樣品體積。

0.1=用于檢測(cè)的樣品體積；           （1÷1000）=1從ug到mg的轉(zhuǎn)換；

（162÷180）=淀粉中游離的D-葡萄糖轉(zhuǎn)化為D-葡萄糖酐的的因子180；               

D=樣品溶液的進(jìn)一步稀釋?zhuān)ㄎ聪♂?/span>1倍或稀釋5倍或11倍）     

淀粉（g/100g樣品）=mg/100mL×100/樣品干重（mg/mL)

注意事項(xiàng)：

1、二甲亞砜作為皮膚刺激物，因此應(yīng)謹(jǐn)慎使用。它通過(guò)皮膚吸收，會(huì)對(duì)皮膚和眼睛造成刺激。使用時(shí)穿戴防護(hù)品并避免濺出溶劑，盡可能在通風(fēng)柜中使用。