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谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶（GST）檢測試劑盒（微量法100T/96S）
| 貨號 | SH0542 | 售價（元） | 456 |
| 規(guī)格 | 100T/96S | CAS號 |
- 產(chǎn)品簡介
- 相關(guān)產(chǎn)品
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貨號 |
名稱 |
規(guī)格 |
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SH0542 |
谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶（GST）檢測試劑盒（微量法100T/96S） |
100T/96S |
測定意義：
GST是一種具有多種生理功能的蛋白質(zhì)家族，主要存在于細胞質(zhì)內(nèi)。GST是體內(nèi)解毒酶系統(tǒng)的重要組成部分，主要催化各種化學(xué)物質(zhì)及其代謝產(chǎn)物與GSH的巰基共價結(jié)合，使親電化合物變?yōu)橛H水物質(zhì)，易于從膽汁或尿液中排泄，達到將體內(nèi)各種潛在或具備毒性的物質(zhì)降解并排出體外的目的。因此，GST在保護細胞免受親電子化合物的損傷中發(fā)揮著重要的生物學(xué)功能。此外，因為GST具有GSH-Px活性，亦稱為non-Se GSH-Px，具有修復(fù)氧化破壞的大分子如DNA、蛋白質(zhì)等的功能。注意，GST催化的反應(yīng)減少GSH含量，但是不增加GSSG含量。
測定原理：
GST催化GSH與CDNB結(jié)合，其結(jié)合產(chǎn)物的光吸收峰波長為340nm；通過測定340nm波長處吸光度上升速率，即可計算出GST活性。
組成：
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產(chǎn)品名稱 |
SH0542-100T/96S |
Storage |
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試劑一：液體 |
120ml |
4℃ |
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試劑二：液體 |
22ml |
4℃ |
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試劑三：粉劑 |
1瓶 |
4℃ |
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說明書 |
一份 |
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試劑三：粉劑×1瓶，4℃保存。臨用前加2 ml蒸餾水溶解。
自備儀器和用品：
低溫離心機、水浴鍋、可調(diào)節(jié)移液器、紫外分光光度計/酶標儀、微量石英比色皿/96孔板、和蒸餾水。
粗酶液提取：
1. 組織：按照組織質(zhì)量（g）：試劑一體積(ml)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1ml試劑一）進行冰浴勻漿。8000g，4℃離心10min，取上清置冰上待測。
2. 細菌、真菌：按照細胞數(shù)量（104個）：試劑一體積（ml）為500~1000：1的比例（建議500萬細胞加入1ml試劑一），冰浴超聲波破碎細胞（功率300w，超聲3秒，間隔7秒，總時間3min）；然后8000g，4℃，離心10min，取上清置于冰上待測。
3. 血清等液體：直接測定。
測定：
1. 分光光度計/酶標儀預(yù)熱30 min，調(diào)節(jié)波長到340 nm，用蒸餾水調(diào)零。
2. 試劑三放在25℃（一般物種）或者37℃（哺乳動物）保溫。
3. 測定管：取微量石英比色皿或96孔板，加入20μl上清液，180μl試劑二和20μl試劑三，迅速混勻后于340nm測定吸光度變化，記錄10 s和310 s吸光度為A1和A2。
GST活性計算公式：
a.使用微量石英比色皿測定的計算公式如下
(1). 按蛋白濃度計算
活性單位定義：在25℃或者37℃中，每毫克蛋白每分鐘催化1nmol/L CDNB與GSH結(jié)合為1個酶活單位。
GST（nmol/min/mg prot）=(A2-A1)÷ε÷d×109×V反總÷(Cpr×V樣)÷T
=230×(A2-A1) ÷Cpr
(2). 按樣本質(zhì)量計算
活性單位定義：在25℃或者37℃中，每克樣品每分鐘催化1nmol/L CDNB與GSH結(jié)合為1個酶活單位。
GST（nmol/min/g 鮮重）=(A2-A1)÷ε÷d×109×V反總÷(W×V樣÷V樣總)÷T
=230×(A2-A1)÷W
（3）按細胞數(shù)量計算
活性單位定義：在25℃或者37℃中，每104個細胞每分鐘催化1nmol/L CDNB與GSH結(jié)合為1個酶活單位。
GST（nmol/min/104 cell）=(A2-A1)÷ε÷d×109×V反總÷(細胞數(shù)量×V樣÷V樣總)÷T
=230×(A2-A1) ÷細胞數(shù)量
（4）按液體體積計算
活性單位定義：在25℃或者37℃中，每毫升液體每分鐘催化1nmol/L CDNB與GSH結(jié)合為1個酶活單位。
GST（nmol/min/ml）=(A2-A1)÷ε÷d×109×V反總÷V樣÷T
= 230×(A2-A1)
ε：產(chǎn)物摩爾消光系數(shù)，9.6×103 L/mol /cm；d：比色皿光徑，1cm；106：1mol=1×106μmol；V反總：反應(yīng)體系總體積，220μl=2.2×10-4 L；Cpr：上清液蛋白質(zhì)濃度（mg/ml），需要另外測定，建議選用本公司生產(chǎn)的BCA蛋白質(zhì)濃度測定試劑盒；W ：樣品質(zhì)量；V樣：加入反應(yīng)體系中上清液體積，20μl=0.02 ml；V樣總：提取液體積，1 ml；T：反應(yīng)時間（min），5min。
b.使用96孔板測定的計算公式如下
(1). 按蛋白濃度計算
活性單位定義：在25℃或者37℃中，每毫克蛋白每分鐘催化1nmol/L CDNB與GSH結(jié)合為1個酶活單位。
GST（nmol/min/mg prot）=(A2-A1)÷ε÷d×109×V反總÷(Cpr×V樣)÷T
=460×(A2-A1) ÷Cpr
(2). 按樣本質(zhì)量計算
活性單位定義：在25℃或者37℃中，每克樣品每分鐘催化1nmol/L CDNB與GSH結(jié)合為1個酶活單位。
GST（nmol/min/g 鮮重）=(A2-A1)÷ε÷d×109×V反總÷(W×V樣÷V樣總)÷T
=460×(A2-A1)÷W
（3）按細胞數(shù)量計算
活性單位定義：在25℃或者37℃中，每104個細胞每分鐘催化1nmol/L CDNB與GSH結(jié)合為1個酶活單位。
GST（nmol/min/104 cell）=(A2-A1)÷ε÷d×109×V反總÷(細胞數(shù)量×V樣÷V樣總)÷T
=460×(A2-A1)÷細胞數(shù)量
（4）按液體體積計算
活性單位定義：在25℃或者37℃中，每毫升液體每分鐘催化1nmol/L CDNB與GSH結(jié)合為1個酶活單位。
GST（nmol/min/ml）=(A2-A1)÷ε÷d×109×V反總÷V樣÷T
=460×(A2-A1)
ε：產(chǎn)物摩爾消光系數(shù)，9.6×103 L/mol /cm；d：96孔板光徑，0.5cm；106：1mol=1×106μmol；V反總：反應(yīng)體系總體積，220μl=2.2×10-4 L；Cpr：上清液蛋白質(zhì)濃度（mg/ml），需要另外測定，建議選用本公司生產(chǎn)的BCA蛋白質(zhì)濃度測定試劑盒；W ：樣品質(zhì)量；V樣：加入反應(yīng)體系中上清液體積，20μl=0.02 ml；V樣總：提取液體積，1 ml；T：反應(yīng)時間（min），5min。
注意事項：
1. 樣品處理等過程均需要在冰上進行，且須在當(dāng)日測定酶活力；
2. 細胞中GST活性測定時，細胞數(shù)目須在300萬-500萬之間，細胞中GST的提取時可加試劑一后研磨或超聲波處理，不能用細胞裂解液處理細胞；
3. 本法測定GST活性的線性范圍可達76 μmol/min /L，測定前先用1～2個樣做預(yù)實驗，如5min內(nèi)反應(yīng)不成線性，須對樣品用蒸餾水稀釋，計算結(jié)果乘以稀釋倍數(shù)；
4. 測定反映的溫度對測定結(jié)果有影響，請控制在25℃或者37℃（哺乳動物）。