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支鏈/直鏈/總淀粉含量檢測試劑盒（分光光度法50T/48S）
| 貨號 | SH0294 | 售價（元） | 1920 |
| 規(guī)格 | 50T/48S | CAS號 |
- 產(chǎn)品簡介
- 相關(guān)產(chǎn)品
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貨號 |
名稱 |
規(guī)格 |
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SH0294 |
支鏈/直鏈/總淀粉含量檢測試劑盒（分光光度法50T/48S） |
50T/48S |
谷物淀粉中的直鏈淀粉最常見的測定方法是對直鏈淀粉的碘結(jié)合能力進行電位法、電流法或比色法測量，從而形成直鏈淀粉-碘包合復(fù)合物。然而，這些方法存在不確定性。支鏈淀粉-碘復(fù)合物也會形成，它們會降低通過非比色法測量的游離碘的濃度，并且可能會在與比色法中的直鏈淀粉-碘復(fù)合物相似的波長處吸收。
本試劑盒利用伴刀豆球蛋白A只與支鏈淀粉結(jié)合而不與直鏈淀粉結(jié)合的特性，使其分離，再用僅水解淀粉的酶復(fù)合物使淀粉水解為葡萄糖，通過檢測葡萄糖含量得到直鏈、支鏈和總淀粉的含量。
保存條件：
未配制前在規(guī)定存儲條件下6個月內(nèi)有效，配制使用后在規(guī)定存儲條件下3個月內(nèi)有效。（各組分詳細儲存條件見瓶身）
試劑盒組成與配制：
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試劑名稱 |
儲存條件 |
SH0294-50T |
配制過程 |
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試劑一 |
-20℃ |
粉劑 mg×1瓶 |
用前甩幾下試劑落入底部，再加25ml的ConA溶劑將其溶解備用，用前可分為適當(dāng)大小的小份，并在使用之間儲存在-10℃以下的聚丙烯管中，如有可能，在使用過程中保持冷卻。（未配制時在-20℃穩(wěn)定2年以上，配制使用后在-20℃穩(wěn)定1~3個月） |
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試劑二 |
-20℃ |
粉劑 mg×1瓶 |
用前甩幾下試劑落入底部，再將瓶中內(nèi)容物溶解在10 ml乙酸鈉緩沖液（100 mM，pH 4.5）中。分為適當(dāng)大小的等分試樣，并在使用期間儲存在-10℃以下的聚丙烯管中，如有可能，在使用過程中保持冷卻，（未配制時在-20℃穩(wěn)定2年以上，配制使用后在-20℃穩(wěn)定1~3個月） |
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試劑三 |
4℃ |
粉劑g×1瓶 |
用之前加450ml蒸餾水溶解混勻，后用2M氫氧化鉀調(diào)節(jié)至pH7.4，最后用蒸餾水定容至500ml，即為試劑三。 |
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試劑四 |
-20℃ |
粉劑 mg×1瓶 |
用60ml試劑三緩沖液溶解試劑四中的內(nèi)容物，并將其定量轉(zhuǎn)移到含有剩余試劑三緩沖液的瓶子中。用鋁箔蓋住這個瓶子，以保護密封的試劑不受光照。（未配制時在2-5℃或＜-10℃下存放超過12個月，配制使用后在2-5℃或＜-20℃可穩(wěn)定1~3個月） 備注：如果該試劑要以冷凍狀態(tài)儲存，則最好將其分裝為小份，在使用過程中僅冷凍/解凍一次。 新制備試劑，其顏色為淺黃色或淺粉色。在2-3個月后，若該溶液將呈現(xiàn)出更強烈的粉紅色應(yīng)立即對照蒸餾水讀數(shù)，吸光度應(yīng)小于0.05，若大于此數(shù)值，則表示該溶液不可再使用。 |
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標準品 |
4℃ |
液體5ml×1瓶 |
D-葡萄糖標準溶液（5 ml，1.0 mg/ml） |
1. 所需的儀器和用品：可見分光光度計、10mm玻璃比色皿、水浴鍋、可調(diào)式移液器、冰、 二甲基亞砜（DMSO,分析級）、乙醇、乙酸和蒸餾水
2. 需配試劑：
乙酸鈉緩沖液（100 mM，pH 4.5）：
向900 ml蒸餾水中添加5.9 ml冰醋酸，通過添加NaOH溶液將pH值調(diào)節(jié)至pH 4.5，加入0.2g疊氮化鈉（防腐劑，若沒有該試劑可不添加），調(diào)節(jié)體積至1L。
濃縮ConA溶劑（600 mM，pH 6.4醋酸鈉緩沖液）：
稱取49.2 g無水乙酸鈉，175.5 g NaCl，0.5g二水合CaCl2，0.7g 六水合MgCl2和0.7 g 四水合MnCl2，后加入900ml蒸餾水。逐滴加入冰醋酸，調(diào)節(jié)pH至6.4（不能低于 6.4，否則重新配置），然后用蒸餾水將其定容至1L。
ConA溶劑（工作濃度）：取30ml濃縮ConA溶劑用蒸餾水將其定容（比例為3 ：7）至100ml，現(xiàn)用現(xiàn)配。
淀粉含量測定：
1. 準確稱量淀粉或面粉樣品20±0.2mg，放入 10 ml離心管中；
2. 向離心管中加入1ml DMSO，同時在渦旋儀上低速輕輕攪拌；之后蓋上管子，在100℃沸水浴中加熱，直到樣品完全分散（約1min）；
注意：需確保沒有凝膠狀的淀粉塊存在
3. 在渦旋儀上高速攪拌離心管中的內(nèi)容物，并將離心管放入水浴鍋中100℃水浴15min，期間使用渦旋儀混勻3~5次。
4. 加熱結(jié)束后立即對樣品進行渦旋并加入 2 ml 乙醇（95%(v/v)），繼續(xù)在渦旋儀上持續(xù)攪拌，混合均勻后再加入 4 ml 乙醇（95%(v/v)），蓋上管子并倒置使樣品于液體充分混合15min；
注意：倒置靜置時管中會形成淀粉沉淀，為正?，F(xiàn)象
5. 將離心管以2,000xg離心5min，棄去上清液，倒置在紙巾上瀝干10min，確保所有的乙醇都已排空，將沉淀用于在隨后的直鏈淀粉和總淀粉測定中。
6. 將含有淀粉樣品沉淀的離心管放置在渦旋儀上輕輕渦旋同時加入2ml DMSO并立即渦旋混合，之后將離心管放入水浴鍋中100℃沸水浴15min，并不時攪拌，防止出現(xiàn)凝膠狀的塊狀物；
7. 將試管從沸水浴中取出后冷卻至室溫，加入4ml ConA溶劑，充分混合，然后將試管內(nèi)容物定量轉(zhuǎn)移（用ConA溶劑反復(fù)洗滌）到25 ml容量瓶中，并定容至25ml，即為待測液。注：若是谷物樣本，第6步得到的溶液中有雜質(zhì)，需待自然冷卻 5min 后于3000rpm 室溫（低于10℃會凍結(jié)）離心 5min，上清液備用；若是純淀粉樣本，第6步得到的溶液呈澄清狀，不需離心自然冷卻即可。 注意：樣品應(yīng)在2小時內(nèi)進行檢測。
上機檢測：
（1）.可見分光光度計預(yù)熱 30min 以上，調(diào)節(jié)波長至 510nm，空白檢測管調(diào)零。
（2）.直鏈淀粉上清液制備，在 EP 管中依次加入：
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試劑名稱 |
直鏈淀粉測定管（ml） |
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待測液 |
1ml |
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試劑一 |
0.5ml |
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反復(fù)顛倒混勻（不能渦旋）幾下，靜置 1 h， 14000rpm 室溫離心 10min，上清液待測 |
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上清液 |
1 ml |
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乙酸鈉緩沖液 （100 mM，pH 4.5） |
3 ml |
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95-100℃煮沸 5min 后，40℃溫育 5min， 觀察：有沉淀產(chǎn)生 |
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試劑二 |
0.1 ml |
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混勻，40℃ 水浴 30min后，2000g室溫離心5min，取上清液待測 |
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（3）.總淀粉上清液制備，在 EP 管中依次加入：
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試劑名稱 |
總淀粉測定管（ml） |
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待測液 |
0.5 ml |
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乙酸鈉緩沖液 （100 mM，pH 4.5） |
4 ml |
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試劑二 |
0.1 ml |
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40℃ 水浴 30min 后待測 |
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（4）.顯色反應(yīng)：
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試劑名稱 |
直鏈淀粉測定管（ml） |
總淀粉測定管（ml） |
空白管（僅做一次） |
標準管（僅做一次） |
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樣品 |
1 ml（直鏈淀粉上清液） |
1 ml（總淀粉上清液） |
1 ml（乙酸鈉緩沖液（100 mM，pH 4.5）） |
0.1 ml（標準品）+0.9 ml（乙酸鈉緩沖液（100 mM，pH 4.5）） |
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顯色 （三和四混合液） |
4 ml |
4 ml |
4 ml |
4 ml |
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混勻，40℃水浴避光20min，于 510nm 處讀取吸光值 A |
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反應(yīng)結(jié)束后將3ml液體轉(zhuǎn)移至玻璃比色皿中，于510nm處讀數(shù)；
注意事項：
1、二甲亞砜作為皮膚刺激物，因此應(yīng)謹慎使用。它通過皮膚吸收，會對皮膚和眼睛造成刺激。使用時穿戴防護品并避免濺出溶劑，盡可能在通風(fēng)柜中使用。
2. 刀豆球蛋白 A 通過吸入、皮膚接觸和攝入有害。影響可能是不可逆的并且可能涉及致畸作用。處理結(jié)晶 Con A 時穿戴適當(dāng)?shù)姆雷o用品及佩戴手套。