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Ca++Mg++-ATP酶檢測試劑盒（微量法100T/48S）
| 貨號 | SH0255 | 售價（元） | 504 |
| 規(guī)格 | 100T/48S | CAS號 |
- 產(chǎn)品簡介
- 相關(guān)產(chǎn)品
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貨號 |
名稱 |
規(guī)格 |
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SH0255 |
Ca++ Mg++- ATP酶活性檢測試劑盒（微量法100T/48S） |
100管/48樣 |
測定意義：
Ca++ Mg++-ATP酶廣泛分布于植物、動物、微生物和細胞中，可催化ATP水解生成ADP和無機磷。測定原理：
根據(jù)Ca++ Mg++-ATP酶分解ATP生成ADP及無機磷，通過測定無機磷的量來確定ATP酶活性高低。
試劑的組成和配制：
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產(chǎn)品名稱 |
SH0255-100T/48S |
Storage |
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提取液：液體 |
100ml |
4℃ |
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試劑一：液體 |
10ml |
4℃ |
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試劑二：粉劑 |
1瓶 |
-20℃ |
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試劑三：液體 |
2ml |
4℃ |
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試劑四：粉劑 |
1瓶 |
4℃ |
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試劑五：粉劑 |
1瓶 |
4℃ |
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試劑六：粉劑 |
1瓶 |
4℃ |
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試劑七：液體 |
25ml |
室溫 |
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試劑八：10mmol/L 標準磷貯備液 |
10ml |
4℃ |
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說明書 |
一份 |
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試劑二：粉劑×1瓶，-20℃保存；臨用前加入6ml蒸餾水充分混勻待用；用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復(fù)凍融；
試劑四：粉劑×1瓶，4℃保存。用時加入3ml蒸餾水， 4℃保存；
試劑五：粉劑×1瓶, 4℃保存。用時加入25ml蒸餾水，溶解后4℃保存一周；
試劑六：粉劑×1瓶, 4℃保存。用時加入25ml蒸餾水，溶解后4℃保存一周；
0.5μmol/ml標準磷應(yīng)用液配制：將試劑八 20倍稀釋，即取 0.1ml試劑八加1.9ml蒸餾水充分混勻；
定磷劑的配制：按H2O: 試劑五:試劑六:試劑七=2:1:1:1 的比例配制，配好的定磷劑應(yīng)為淺黃色。若無色則試劑失效，若是藍色則為磷污染，定磷劑現(xiàn)用現(xiàn)配。
注意：配試劑最好用新的燒杯、玻棒和玻璃移液器，也可以用一次性塑料器皿，避免磷污染。
需自備的儀器及用品:
可見分光光度計/酶標儀、水浴鍋、臺式離心機、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰和蒸餾水。
樣品酶液的制備：
1、細菌、細胞或組織樣品的制備：
細菌或培養(yǎng)細胞：先收集細菌或細胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；按照細菌或細胞數(shù)量（104個）：提取液體積（ml）為500~1000：1的比例（建議500萬細菌或細胞加入1ml提取液），超聲波破碎細菌或細胞（冰浴，功率20％或200W，超聲3s，間隔10s，重復(fù)30次）；8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。
組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(ml)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1ml提取液），進行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。
2、血清（漿）樣品：直接檢測。
操作步驟：
1、分光光度計或酶標儀預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長至660nm，蒸餾水調(diào)零。
2、酶促反應(yīng)（在EP管中加入下列試劑）
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對照管 |
測定管 |
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試劑一（μl） |
65 |
45 |
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試劑二（μl） |
60 |
60 |
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試劑三（μl） |
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20 |
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樣本 （μl） |
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100 |
混勻，37℃（哺乳動物）或25℃（其他物種）準確水浴10min
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試劑四（μl） |
25 |
25 |
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樣本 （μl） |
100 |
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混勻，8000g，25℃離心10min，取上清液
3、定磷（在EP管或96孔板中加入下列試劑）
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空白管 |
標準管 |
對照管 |
測定管 |
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0.5μmol/ml標準磷應(yīng)用液（μl） |
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20 |
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上清液（μl） |
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20 |
20 |
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蒸餾水（μl） |
20 |
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混勻，室溫放置30min，在 660nm處，記錄各管吸光值。
注意事項
1、由于每一個樣都必須做對照，本試劑盒100管只能測 48份Ca++ Mg++-ATP酶。
2、此法具有微量、靈敏、快速的特點。所以對測定所用試管要求嚴格無磷。避免磷污染是檢測成敗的關(guān)鍵。
3、空白管和標準管只要做一管。
Ca++ Mg++- ATPase活力的計算：
1、血清（漿）Ca++ Mg++- ATPase活力的計算:
定義：每小時每毫升血清（漿）中Ca++ Mg++- ATP 酶分解ATP 產(chǎn)生1μmol無機磷的量為一個酶活力單位。
Ca++ Mg++-ATP酶活力（μmol/h/ml）= [C標準管×V總]×（A測定管-A對照管）÷（A標準管-A空白管）÷V樣÷T=7.5×（A測定管-A對照管）÷（A標準管-A空白管）
2、組織、細菌或細胞中Ca++ Mg++- ATPase活力的計算：
（1）按蛋白濃度計算：
定義：每小時每毫克組織蛋白中Ca++ Mg++- ATP 酶分解ATP 產(chǎn)生1μmol無機磷的量為一個酶活力單位。
Ca++ Mg++-ATP酶活力(μmol/h / mg prot)= [C標準管×V總]×（A測定管-A對照管）÷（A標準管-A空白管）÷（V樣×Cpr）÷T =7.5×（A測定管-A對照管）÷（A標準管-A空白管）÷Cpr
（2）按樣本鮮重計算：
定義：每小時每克組織中Ca++ Mg++-ATP 酶分解ATP 產(chǎn)生1μmol無機磷的量為一個酶活力單位。
Ca++ Mg++-ATP酶活力(μmol/h /g 鮮重)=[C標準管×V總]×（A測定管-A對照管）÷（A標準管-A空白管）÷(W× V樣÷V樣總)÷T=7.5×（A測定管-A對照管）÷（A標準管-A空白管）÷W
（3）按細菌或細胞密度計算：
定義：每小時每1萬個細菌或細胞中Ca++ Mg++-ATP 酶分解ATP 產(chǎn)生1μmol無機磷的量為一個酶活力單位。
Ca++ Mg++-ATP酶活力(μmol/h /104 cell)= [C標準管×V總]×（A測定管-A對照管）÷（A標準管-A空白管）÷(500×V樣÷V樣總)÷T=0.015×（A測定管-A對照管）÷（A標準管-A空白管）
C標準管：標準管濃度，0.5μmol/ml；V總：酶促反應(yīng)總體積，0.25ml；V樣：加入樣本體積，0.1ml ；V樣總：加入提取液體積，1ml；T：反應(yīng)時間，1/6小時；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/ml；W：樣本鮮重，g；500：細菌或細胞總數(shù)，500萬。