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β-半乳糖苷酶（β-GAL）檢測(cè)試劑盒（分光光度法50T/24S）
| 貨號(hào) | SH0186 | 售價(jià)（元） | 744 |
| 規(guī)格 | 50T/24S | CAS號(hào) |
- 產(chǎn)品簡介
- 相關(guān)產(chǎn)品
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貨號(hào) |
名稱 |
規(guī)格 |
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SH0186 |
β-半乳糖苷酶（β-GAL）檢測(cè)試劑盒（分光光度法50T/24S） |
50管/24樣 |
測(cè)定意義：
β-GAL(EC 3.2.1.23)廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中，能夠催化β半乳糖苷化合物中β半乳糖苷鍵水解，此外還具有轉(zhuǎn)半乳糖苷的作用。β-GAL不僅可為植物的快速生長釋放儲(chǔ)存的能量，還能在正常的多糖代謝、細(xì)胞壁組分代謝以及衰老時(shí)細(xì)胞壁降解過程中催化多糖、糖蛋白以及半乳糖脂末端半乳糖殘基的水解，釋放自由的半乳糖。
測(cè)定原理：
β-GAL分解對(duì)-硝基苯-β-D-吡喃半乳糖苷生成對(duì)-硝基苯酚，后者在400nm有最大吸收峰，通過測(cè)定吸光值升高速率來計(jì)算β-GAL活性。
組成：
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產(chǎn)品名稱 |
SH0186-50T/24S |
Storage |
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提取液：液體 |
50ml |
4℃ |
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試劑一：粉劑 |
1瓶 |
4℃ |
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試劑二：液體 |
15ml |
-20℃ |
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試劑三：液體 |
50ml |
4℃ |
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說明書 |
一份 |
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試劑一：粉劑×1瓶，-20℃保存；臨用前每瓶加入5ml蒸餾水，充分溶解備用；用不完的試劑仍-20℃保存。
自備儀器和用品：
可見分光光度計(jì)、臺(tái)式離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液器、1ml玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水。
粗酶液提?。?/span>
1、細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞：先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量（104個(gè)）：提取液體積（ml）為500~1000：1的比例（建議500萬細(xì)菌或細(xì)胞加入1ml提取液），超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞（冰浴，功率20％或200W，超聲3s，間隔10s，重復(fù)30次）；15000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測(cè)。
2、組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(ml)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1ml提取液），進(jìn)行冰浴勻漿。15000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測(cè)。
3、培養(yǎng)液等液體樣本：直接檢測(cè)。
測(cè)定步驟：
1、分光光度計(jì)預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長至400nm，蒸餾水調(diào)零。
2、樣本測(cè)定（在EP管中依次加入下列試劑）：
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試劑名稱（μl） |
測(cè)定管 |
對(duì)照管 |
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試劑一 |
200 |
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蒸餾水 |
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200 |
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試劑二 |
250 |
250 |
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樣本 |
50 |
50 |
迅速混勻，放入37℃準(zhǔn)確水浴30min
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試劑三 |
1000 |
1000 |
充分混勻，400nm處測(cè)定吸光值A，計(jì)算ΔA=A測(cè)定-A對(duì)照。每個(gè)測(cè)定管需設(shè)一個(gè)對(duì)照管。
β-GAL活性計(jì)算：
標(biāo)準(zhǔn)條件下測(cè)定的回歸方程為y =0.00543x -0.0027；x為標(biāo)準(zhǔn)品濃度（nmol/ml），y為吸光值。
（1）按樣本蛋白濃度計(jì)算：
單位的定義：每mg組織蛋白每分鐘產(chǎn)生1nmol對(duì)-硝基苯酚定義為一個(gè)酶活力單位。
β-GAL活力(nmol/min/mg prot)=[(ΔA+0.0027)÷0.00543×V反總]÷(V樣×Cpr)÷T
=61.39×(ΔA+0.0027) ÷Cpr
需要另外測(cè)定，建議使用本公司BCA蛋白質(zhì)含量測(cè)定試劑盒。
（2）按樣本鮮重計(jì)算：
單位的定義：每g組織每分鐘產(chǎn)生1nmol對(duì)-硝基苯酚定義為一個(gè)酶活力單位。
β-GAL活力(nmol/min /g鮮重)＝[(ΔA+0.0027)÷0.00543×V反總]÷(W×V樣÷V樣總)÷T
=61.39×(ΔA+0.0027) ÷W
（3）按細(xì)菌或細(xì)胞密度計(jì)算：
單位的定義：每1萬個(gè)細(xì)菌或細(xì)胞每分鐘產(chǎn)生1nmol對(duì)-硝基苯酚定義為一個(gè)酶活力單位。
β-GAL活力(nmol/min /104 cell)=[(ΔA+0.0027) ÷0.00543×V反總]÷(500×V樣÷V樣總)÷T
=0.123×(ΔA +0.0027)
（4）按液體體積計(jì)算：
單位的定義：每ml液體樣本每分鐘產(chǎn)生1nmol對(duì)-硝基苯酚定義為一個(gè)酶活力單位。
β-GAL活力(nmol/min /ml)＝[(ΔA+0.0027)÷0.00543×V反總]÷V樣÷T
=61.39×(ΔA+0.0027)
V反總：反應(yīng)體系總體積，0.5ml；V樣：加入反應(yīng)體系中樣本體積，0.05ml；V樣總：加入提取液體積，1ml；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/ml；W：樣本質(zhì)量，g； 500：細(xì)胞或細(xì)菌總數(shù)，500萬；T：反應(yīng)時(shí)間，30min。