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谷氨酸合成酶（GOGAT）檢測試劑盒（分光光度50T/48S）
| 貨號 | SH0123 | 售價（元） | 840 |
| 規(guī)格 | 50T/48S | CAS號 |
- 產(chǎn)品簡介
- 相關產(chǎn)品
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貨號 |
名稱 |
規(guī)格 |
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SH0123 |
谷氨酸合成酶（GOGAT）檢測試劑盒（分光光度50T/48S） |
50管/48樣 |
測定意義：
GOGAT分布于植物中，和谷氨酰胺合成酶共同構(gòu)成GS/GOGAT循環(huán)，參與氨同化的調(diào)控。
測定原理：
GOGAT催化谷氨酰胺的氨基轉(zhuǎn)移到α-酮戊二酸，形成兩分子的谷氨酸；同時NADH氧化生成NAD+，340nm吸光度的下降速率可以反映GOGAT活性大小。
組成：
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產(chǎn)品名稱 |
SH0123-50T/48S |
Storage |
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提取液：液體 |
60ml |
4℃ |
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試劑一：液體 |
60ml |
4℃ |
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試劑二：粉劑 |
2瓶 |
4℃ |
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說明書 |
一份 |
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自備儀器和用品：
紫外分光光度計、臺式離心機、水浴鍋、可調(diào)式移液器、1ml石英比色皿、研缽、冰和蒸餾水。
粗酶液提?。?/span>
細菌或培養(yǎng)細胞：先收集細菌或細胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；按照細菌或細胞數(shù)量（104個）：提取液體積（ml）為500~1000：1的比例（建議500萬細菌或細胞加入1ml提取液），超聲波破碎細菌或細胞（冰浴，功率20％或200W，超聲3s，間隔10s，重復30次）；8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。
組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(ml)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1ml提取液），進行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。
測定步驟：
1、 分光光度計預熱30min以上，調(diào)節(jié)波長至340nm，蒸餾水調(diào)零。
2、 樣本測定
（1）工作液的配制：在試劑二中加入25ml試劑一充分溶解混勻，置于37℃（哺乳動物）或25℃（其它物種）水浴5min；現(xiàn)配現(xiàn)用（配好后3h內(nèi)用完）；
（2）取0.1ml樣本和0.9ml工作液于1ml比色皿中，混勻，加工作液的同時開始計時，在340 nm波長下記錄20秒時的初始吸光度A1和5分20秒時的吸光度A2，計算ΔA=A1-A2。
GOGAT活性計算：
（1）按樣本蛋白濃度計算：
單位的定義：每mg組織蛋白每分鐘消耗1 nmol的NADH定義為一個酶活力單位。
GOGAT（nmol /min/mg prot）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(V×樣Cpr) ÷T=321×ΔA÷Cpr
（2）按樣本鮮重計算：
單位的定義：每g組織每分鐘消耗1 nmol NADH定義為一個酶活力單位。
GOGAT（nmol /min /g 鮮重）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(W ×V樣÷V樣總) ÷T=321×ΔA÷W
（3）按細菌或細胞密度計算：
單位的定義：每1萬個細菌或細胞每分鐘消耗1 nmol NADH定義為一個酶活力單位。
GOGAT（nmol /min /104 cell）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(500×V樣÷V樣總) ÷T=0.642×ΔA
V反總：反應體系總體積，1×10-3 L；ε：NADH摩爾消光系數(shù)，6.22×103 L / mol /cm；d：比色皿光徑，1cm；V樣：加入樣本體積，0.1 ml；V樣總：加入提取液體積，1 ml；T：反應時間，5 min；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/ml；W：樣本質(zhì)量，g；500：細菌或細胞總數(shù)，500萬。